Sel Totaal RNA Isolaasje Kit Totaal RNA Isolaasje Purification Kits út sel
Kit beskriuwing:
Heech suvere en heechweardige totale RNA kin yn 11 minuten wurde krigen fan ferskate kweekte sellen.
RNase-frij
Operearre by keamertemperatuer (15-25 ℃)
Mei DNA-reinigingskolom
Hege RNA-opbringst
Snel: Finish ekstraksje yn 11 minuten
Feiligens: Gjin Organyske gemyske
Beskriuwing
Dizze kit brûkt de spinkolom en formule ûntwikkele troch Foregene, dy't effisjint hege suverens en heechweardich totale RNA kin ekstrahearje út sellen dy't yn 96, 24, 12, en 6-well platen wurde kweekt.
De kit biedt in effisjinte DNA-reinigingskolom, dy't de supernatant en sellysate maklik kin skiede, genomysk DNA bine en ferwiderje.De operaasje is ienfâldich en tiidbesparend.
Thy RNA-allinne Column kin effisjint bine RNA mei in unike formule.In grut oantal samples kinne tagelyk wurde ferwurke.
Kit komponinten
| Kit komposysje | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNase-frije ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-Allinnich Kolom | 50 | 200 |
| DNA-reinigingskolom | 50 | 200 |
| Ynstruksje | 1 | 1 |
* Draach asjebleaft handschoenen en nim beskermjende maatregels tidens de operaasje, om't Buffer cRL1 en Buffer RW1 irritearjende chaotropyske sâlten befetsje.
Funksjes & foardielen
■ It hiele proses wurdt eksploitearre by keamertemperatuer (15-25 ℃), sûnder iis bad en lege temperatuer centrifugation.
■ De hiele kit is RNase-frij, gjin soargen oer RNA-degradaasje.
■ DNA-Cleaning Column bynt spesifyk DNA, sadat de kit kin fuortsmite genomic DNA fersmoarging sûnder tafoegjen fan ekstra DNase.
■ Hege RNA-opbringst: RNA-allinich Kolom en unike formule kinne RNA effisjint suverje.
■ Snelle snelheid: maklik te betsjinjen en kin yn 11 minuten foltôge wurde.
■ Feiligens: Gjin organysk reagens is nedich.
■ Hege kwaliteit: It suvere RNA is fan hege suverens, frij fan proteïne en oare ûnreinheden, en kin foldwaan oan ferskate folgjende eksperiminten.
Kit applikaasje
It is geskikt foar ekstraksje en suvering fan totale RNA út kweekte sellen yn 96, 24, 12, en 6-well platen.
Wurk flow
Diagram
De agarose gel batterij diagram fan Cell Total RNA Isolation Kit behannele de boppesteande ferskillende oantallen sellen, 20μl folume elution, nim 2μl suvere totale RNA 1%.
Opslach en shelf libben
De kit kin wurde opslein foar 12 moannen by keamertemperatuer (15-25 ℃) of 2-8 ℃ foar langere tiid (24 moannen).
Buffer cRL1 kin wurde opslein by 4 ℃ foar 1 moanne nei it tafoegjen fan 2-hydroxy-1-ethanethiol (opsjoneel).
RNA wurdt net ekstrahearre of RNA-opbringsten binne leech
D'r binne faak in ferskaat oan faktoaren dy't de effisjinsje fan herstel beynfloedzje, lykas: RNA-ynhâld fan weefselmonster, wurkwize, elueringsvolumint, ensfh.
1. Iisbad of kryogenic (4 ° C) centrifugation waard útfierd yn operaasje.
Oanbefelling: Operearje by keamertemperatuer (15-25 ° C) troch it hiele proses, net iisbad en sintrifugerje by lege temperatueren.
2. Unjildich sample behâld of oermjittich sample opslach tiid.
Oanrikkemedaasje: Bewarje samples by -80 °C of befrieze yn floeibere stikstof en foarkomme werhelle gebrûk fan frieze-dooi;besykje farsk weefsel as kweekte sellen te brûken foar RNA-ekstraksje.
3. Net genôch monster lysis.
Oanbefelling: As jo weefsel homogenisearje, soargje derfoar dat it weefsel genôch homogenisearre is en dat de weefselsellen genôch splitst binne om de frijlitting fan RNA te ferklearjen.
4. De eluent is net goed tafoege.
Oanbefelling: Befêstigje dat RNase-Free ddH2O wurdt tafoege dropwise oan 'e midden fan' e suvering kolom membraan.
5. It juste folume fan absolute ethanol waard net tafoege oan Buffer RL2 of Buffer RW2.
Oanbefelling: Folgje de ynstruksjes, foegje it juste folume fan absolute ethanol ta oan Buffer RL2 en Buffer RW2 en mingje goed foardat jo de kit brûke.
6. Tissue sample dosage is net passend.
Oanbefelling: Brûk 10-20 mg weefsel of (1-5) × 106sellen per 500 μl buffer RL1, om't oermjittich weefselgebrûk kin resultearje yn fermindere RNA-ekstraksje.
7. Unjildich elueringsvolume of ûnfolsleine eluaasje.
Oanbefelling: It elueringsvolumint fan 'e suveringskolom is 50-200 μl;as it elueringseffekt net befredigjend is, wurdt it oanrikkemandearre om de pleatsingstiid by keamertemperatuer te ferlingjen nei it tafoegjen fan foarferwaarme RNase-frije ddH2O, bygelyks foar 5-10 min.
8.De suvering kolom hat ethanol residu nei Buffer RW2 waskje.
Oanbefelling: As d'r ethanol-residu is nei it waskjen fan Buffer RW2, lege buis-sintrifugaasje foar 1min, kin de tiid foar de lege buis-sintrifugaasje-operaasje ferhege wurde nei 2min, of de suveringskolom kin 5 min op keamertemperatuer pleatst wurde om de oerbliuwende ethanol adekwaat te ferwiderjen.
Purified RNA wurdt degradearre
De kwaliteit fan it suvere RNA is relatearre oan faktoaren lykas it behâld fan it stekproef, RNase-fersmoarging, en manipulaasje, ensfh.
1. Tissue samples wurde net op 'e tiid hâlden.
Oanrikkemedaasje: As weefselmonsters of sellen net op 'e tiid wurde brûkt nei it sammeljen, krij dan fuortendaliks by -80 ° C of floeibere stikstof.Om RNA te ekstrahearjen, brûk in nij nommen weefsel- of selmonster wannear mooglik.
2. Werhelle freeze-thawing fan weefselmonsters.
Oanbefelling: By it opslaan fan weefselmonsters is it it bêste om se yn lytse stikjes te snijen foar behâld, en ien fan 'e stikken te ferwiderjen by it brûken fan se om werhelle freeze-ûntdooijen fan it stekproef en degradaasje fan RNA te foarkommen.
3. RNase wurdt yntrodusearre of net wearing wegwerphandschoenen, maskers, ensfh tidens de operaasje.
Oanbefelling: RNA-ekstraksje-eksperiminten wurde it bêste útfierd yn aparte RNA-manipulaasjekeamers en de tafel wurdt wiske foar it eksperimint.
Draach wegwerphandschoenen en maskers tidens it eksperimint om RNA-degradaasje te minimalisearjen feroarsake troch de ynfiering fan RNase.
4. Reagents binne kontaminearre mei RNase by gebrûk.
Oanbefelling: Ferfange mei in nije Animal Total RNA Isolation Kit foar relatearre eksperiminten.
5. De sintrifuge buizen, tips, ensfh brûkt yn RNA manipulaasje binne kontaminearre mei RNase.
Oanrikkemedaasje: Befêstigje dat de sintrifuge buizen, tips, pipetten, ensfh brûkt yn RNA ekstraksje binne allegear RNase-Free.
Purified verkregen RNA beynfloedet streamôfwerts eksperiminten
RNA suvere troch de suvering kolom, as de sâlt ioanen, protein ynhâld is te grut sil beynfloedzje de streamôfwerts eksperimint, lykas: reverse transkripsje, Northern Blot et al.
1. De elutionearre RNA hat sâlt ion resten.
Oanrikkemedaasje: Befêstigje dat it juste folume fan ethanol is tafoege oan Buffer RW2 en útfiere 2 suvering kolom waskjes op de sintrifugale snelheid oanjûn foar operaasje;as d'r in sâlt-ion-residinsje is, lit de suveringskolom 5 minuten nei Buffer RW2 by keamertemperatuer en fiere sintrifugering om it fuortheljen fan sâltfersmoarging te maksimalisearjen.
2. Ethanol residu yn elutioned RNA.
Oanrikkemedaasje: Befêstigje dat nei it wassen fan buffer RW2 de lege buis-sintrifugaasje-operaasje útfiere by de sintrifugearsnelheid oanjûn foar wurking, de tiid fan 'e lege buis-sintrifugaasje-operaasje ferheegje nei 2 min as d'r noch ethanol-residu is, of lit it op keamertemperatuer foar 5 m litte
