Taljochting fan basis molekulêre biologyske termen
1. cDNA en cccDNA: cDNA is in dûbelstrengige DNA synthesized troch reverse transkriptase út mRNA;cccDNA is in plasmide dûbelstrengs sletten sirkulêr DNA frij fan it chromosoom.
2. Standert folding ienheid: de protein sekundêre struktuer ienheid α-helix en β-sheet kin foarmje strukturele blokken mei spesjale geometryske arranzjeminten troch ferskate ferbinende polypeptiden.Dit soarte fan bepaalde folding wurdt meastal neamd super sekundêre struktuer.Hast alle tertiêre struktueren kinne wurde beskreaun troch dizze falttypen, en sels har kombineare typen, sadat se ek standert foldende ienheden wurde neamd.
3. CAP: cyclic adenosine monophosphate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), it kompleks foarme nei de kombinaasje fan cAMP en CRP wurdt neamd aktivearjen protein CAP (cAMP aktivearre protein)
4. Palindromic folchoarder: De omkearde komplemintêre folchoarder fan in segmint fan in DNA fragmint, faak in beheining enzyme site.
5. micRNA: Komplementêre interfering RNA of antisense RNA, dat is komplemintêr foar de mRNA folchoarder en kin inhibit de oersetting fan mRNA.
6. Ribozyme: RNA mei katalytyske aktiviteit, dy't in autokatalytyske rol spilet yn it splitsingsproses fan RNA.
7. Motyf: D'r binne guon lokale regio's mei ferlykbere trijediminsjonale foarm en topology yn 'e romtlike struktuer fan proteinmolekulen
8. Signal peptide: in peptide mei 15-36 aminosoeren residuen oan de N-terminus tidens protein synteze, dat liedt de transmembrane fan it aaiwyt.
9. Attenuator: In nukleotide-sekwinsje tusken in operatorregio en in struktureel gen dat transkripsje beëiniget.
10. Magic Spot: As de baktearjes groeit en in folslein tekoart oan aminosoeren tsjinkomt, sille de baktearjes in needreaksje produsearje om de ekspresje fan alle genen te stopjen.De sinjalen dy't dizze needreaksje generearje binne guanosine tetrafosfaat (ppGpp) en guanosine pentafosfaat (pppGpp).De rol fan PpGpp en pppGpp is net allinnich ien of in pear operons, mar beynfloedet in grut tal fan harren, dus se wurde neamd super-regulators of magic spots.
11. Upstream promoter elemint: ferwiist nei de DNA-sekwinsje dy't in regeljende rol spilet yn 'e aktiviteit fan' e promoter, lykas TATA yn 'e -10-regio, TGACA yn' e -35-regio, enhancers en attenuators.
12. DNA probe: in bestimpele segmint fan DNA mei in bekende folchoarder, dat wurdt in soad brûkt foar detect ûnbekende sekwinsjes en skerm doelgenen.
13. SD folchoarder: It is de binende folchoarder fan ribosome en mRNA, dy't regulearret oersetting.
14. Monoklonale antykodyk: In antykodym dy't allinich tsjin in inkele antygenyske determinant wurket.
15. Cosmid: It is in keunstmjittich konstruearre eksogenous DNA-fektor dy't de COS-regio's oan beide einen fan 'e fage behâldt en ferbûn is mei it plasmide.
16. Blau-wyt spot-screening: LacZ-gen (kodearjen foar β-galactosidase), it enzyme kin it chromogene substraat X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) ôfbrekke om blau te meitsjen, sadat de stam blau wurdt.As it eksogene DNA wurdt ynfoege, kin it LacZ-gen net útdrukt wurde, en de stam is wyt, om de rekombinante baktearjes te skermjen.Dit wurdt blau-wyt screening neamd.
17. Cis-aktearjend elemint: In spesifike folchoarder fan basen yn DNA dy't regelet gene ekspresje.
18. Klenow-enzyme: Grut fragmint fan DNA-polymerase I, útsein dat de 5'3'-exonuklease-aktiviteit fan it DNA-polymerase I-holoenzyme fuorthelle wurdt
19. Ferankere PCR: brûkt om it DNA fan belang te fersterkjen mei in bekende folchoarder oan ien ein.In poly-dG-sturt waard tafoege oan ien ein fan 'e ûnbekende sekwinsje, en dan waarden de poly-dC en de bekende sekwinsje brûkt as primers foar PCR-amplifikaasje.
20. Fusionprotein: It gen fan eukaryotysk proteïne is ferbûn mei exogenous gen, en it proteïne gearstald út 'e oersetting fan orizjinele geneprotein en exogenous protein wurdt tagelyk útdrukt.
Oare termen foar molekulêre biology
1. De fysike kaart fan DNA is de folchoarder wêryn't de (beheining endonuklease-digested) fragminten fan it DNA-molekule wurde regele.
2. De spalting fan RNase is ferdield yn twa soarten (autokatalysis) en (heterokatalysis).
3. Der binne trije inisjatyf faktoaren yn prokaryotes binne (IF-1), (IF-2) en (IF-3).
4. Transmembrane aaiwiten fereaskje begelieding (sinjaal peptiden), en de rol fan proteïne chaperones is (helpt te fold de peptide keten yn de native konformaasje fan it aaiwyt).
5. Eleminten yn promotors kinne oer it algemien wurde ferdield yn twa soarten: (kearn promotor eleminten) en (upstream promotor eleminten).
6. De ûndersiiksynhâld fan molekulêre biology omfettet benammen trije dielen: (strukturele molekulêre biology), (genekspresje en regeljouwing), en (DNA-rekombinaasjetechnology).
7. De twa kaai eksperiminten demonstrearje dat DNA is it genetysk materiaal binne (pneumococcus ynfeksje fan mûzen) en (T2 fage ynfeksje fan Escherichia coli).potinsjeel).
8. Der binne twa wichtichste ferskillen tusken hnRNA en mRNA: (hnRNA wurdt spliced yn it proses fan it konvertearjen yn mRNA), (de 5' ein fan 'e mRNA wurdt tafoege mei in m7pGppp cap, en der is in ekstra polyadenylation oan de 3' ein fan 'e mRNA acid (polyA) sturt).
9. De foardielen fan de multi-subunit foarm fan proteïne binne (subunit is in ekonomyske metoade foar DNA utilization), (kin ferminderjen de ynfloed fan willekeurige flaters yn proteïne synteze op protein aktiviteit), (aktiviteit kin wêze hiel effisjint en fluch wurde iepene en sluten).
10. De wichtichste ynhâld fan protein folding meganisme earste nucleation teory omfiemet (nucleation), (strukturele ferriking), (final werynrjochting).
11. Galactose hat in dûbele effekt op baktearjes;oan 'e iene kant (it kin brûkt wurde as koalstofboarne foar selgroei);oan de oare kant (it is ek in komponint fan de sel muorre).Dêrom is in cAMP-CRP-ûnôfhinklike promotor S2 nedich foar de permaninte synteze op it eftergrûnnivo;tagelyk is in cAMP-CRP-ôfhinklike promotor S1 nedich om de synteze op hege nivo te regeljen.Transkripsje begjint fan (S2) mei G en fan (S1) sûnder G.
12. Rekombinante DNA technology is ek bekend as (gene cloning) of (molekulêre cloning).It úteinlike doel is (om de genetyske ynformaasje DNA yn ien organisme oer te bringen nei in oar organisme).In typysk DNA-rekombinaasje-eksperimint omfettet meastentiids de folgjende stappen: (1) Extract it doelgen (of eksogene gen) fan it donororganisme, en ferbine it enzymatysk mei in oar DNA-molekule (kloningsvektor) om in nij rekombinant DNA-molekule te foarmjen.② It rekombinante DNA-molekule wurdt oerbrocht nei de ûntfangende sel en replikearre yn 'e ûntfangende sel.Dit proses wurdt transformaasje neamd.③ Skermje en identifisearje dy ûntfangersellen dy't it rekombinante DNA hawwe opnomd.④Kultivearje de sellen dy't rekombinant DNA yn grutte hoemannichten befetsje om te detektearjen oft it gen foar bûtenlânske help wurdt útdrukt.
13. D'r binne twa soarten plasmide-replikaasje: dyjingen dy't strikt kontrolearre wurde troch host-selproteinsynthese wurde neamd (tight plasmids), en dyjingen dy't net strikt regele wurde troch hostselproteinsynthese wurde neamd (relaxearre plasmiden).
14. It PCR-reaksjesysteem moat de folgjende betingsten hawwe: a.DNA-primers (sawat 20 basen) mei komplementêre sekwinsjes oan elk ein fan 'e twa stringen fan it te skieden doelgen.b.Enzymen mei thermyske stabiliteit lykas: TagDNA polymerase.c, dNTPd, DNA folchoarder fan belang as sjabloan
15. It basisreaksjeproses fan PCR omfettet trije stadia: (denaturaasje), (annealing), en (útwreiding).
16. It basisproses fan transgene bisten omfettet meastentiids: ①Yntroduksje fan klonearre frjemde gen yn 'e kearn fan in befruchte aai of embryonale stamsel;②Transplantaasje fan it ynokulearre befruchte aai of embryonale stamsel yn 'e froulike uterus;③ Folsleine embryonale ûntwikkeling en groei Foar de neiteam mei frjemde genen;④ Brûk dizze bisten dy't frjemde aaiwiten kinne produsearje as fokdieren om nije homozygote rigels te fokken.
17. Hybridoma-sellinen wurde oanmakke troch hybridisearjen fan (spleen B) sellen mei (myeloma) sellen, en om't (smiltsellen) hypoxanthine brûke kinne en (bonke sellen) sellendielingsfunksjes leverje, kinne se groeid wurde yn HAT medium.groeie.
18. Mei it ferdjipjen fan it ûndersyk wurdt de earste generaasje fan antykladen neamd (polyklonale antykladen), de twadde generaasje (monoklonale antylders), en de tredde generaasje (genetyske technyk antylders).
19. Op it stuit is de genetyske technyk fan ynsektenfirussen benammen rjochte op baculovirus, dat manifestearret yn 'e ynfiering fan (eksogene toxine-gen);(genen dy't de normale libbenssyklus fan ynsekten fersteure);(feroaring fan firusgenen).
20. De trans-aktearjende proteinfaktoaren dy't oerienkomme mei de mienskiplike eleminten TATA, GC en CAAT yn 'e sûchdier RNA-polymerase II-promotor binne (TFIID), (SP-1) en (CTF / NF1), respektivelik.
ienentweintich.De basale transkripsjefaktoaren fan RNA-polymerase Ⅱ binne TFⅡ-A, TFⅡ-B, TFII-D, TFⅡ-E, en har binende folchoarder is: (D, A, B, E).Dêr't de funksje fan TFII-D is (ferbine oan TATA box).
Twaentweintich.De measte fan 'e transkripsjefaktoaren dy't bine oan DNA wurkje yn' e foarm fan dimers.De funksjonele domeinen fan transkripsjefaktoaren dy't oan DNA bine binne meastentiids de folgjende (helix-turn-helix), (sinkfingermotyf), (basic-leucine) ritsmotyf).
trijeentweintich.D'r binne trije soarten beheining-endonuklease-splitsmodi: (snije oan 'e 5'-kant fan 'e symmetry-as om 5'-kleverige einen te generearjen), (snije oan 'e 3'-kant fan 'e symmetry-as om 3'-kleverige einen te generearjen (snije oan 'e symmetry-as om platte segminten te generearjen)).
fjouwerentweintich.Plasmid DNA hat trije ferskillende konfiguraasjes: (SC-konfiguraasje), (oc-konfiguraasje), (L-konfiguraasje).De earste yn elektroforese is (SC-konfiguraasje).
25. Exogenous gene ekspresje systemen, benammen (Escherichia coli), (Yeast), (Insect) en (Sûchdier sel tabel).
26. De meast brûkte metoaden foar transgene bisten binne: (retrovirale ynfeksjemetoade), (DNA-mikroynjeksjemetoade), (embryonale stamselmetoade).
Applikaasje Molekulêre biology
1. Neam de funksjes fan mear as 5 RNA's?
Transfer RNA tRNA Transfer amino acid Ribosome RNA rRNA Ribosome constitus messenger RNA mRNA Protein synthesis template Heterogene nuclear RNA hnRNA Precursor of mature mRNA small nuclear RNA snRNA Belutsen by hnRNA splicing Lytse RNA scRNA/7SL-RNA /micRNA Regelt gene ekspresje Ribozyme RNA Enzymatysk aktyf RNA
2. Wat is it wichtichste ferskil tusken prokaryotyske en eukaryote promotors?
Prokaryotyske TTGACA --- TATAAT------Inisjaasjeside-35 -10 Eukaryotyske Enhancer---GC ---CAAT----TATAA-5mGpp-inisjaasjeside-110 -70 -25
3. Wat binne de wichtichste aspekten fan keunstmjittige konstruksje fan natuerlike plasmiden?
Natuerlike plasmiden hawwe faak defekten, sadat se net geskikt binne foar gebrûk as dragers foar genetyske manipulaasje, en moatte wurde oanpast en konstruearre: a.Foegje geskikte seleksjemarkergenen ta, lykas twa of mear, dy't maklik te brûken binne foar seleksje, meast antibiotika-genen.b.Fergrutsje of ferminderje geskikte enzyme-snijplakken om rekombinaasje te fasilitearjen.c.Ferkoartje de lingte, ôfsnien ûnnedige fragminten, ferbetterjen de ymport effisjinsje en fergrutsjen de lading kapasiteit.d.Feroarje de repliken, fan strak nei los, fan minder eksimplaren nei mear kopyen.e.Foegje spesjale genetyske eleminten ta neffens de spesjale easken fan genetyske technyk
4. Jou in foarbyld fan in metoade foar differinsjaal screening fan weefselspesifike cDNA?
Twa selpopulaasjes wurde taret, it doelgen wurdt útdrukt of heech útdrukt yn ien fan 'e sellen, en it doelgen wurdt net útdrukt of leech útdrukt yn' e oare sel, en dan wurdt it doelgenen fûn troch hybridisaasje en fergeliking.Bygelyks, tidens it foarkommen en ûntwikkeljen fan tumors sille tumorsellen mRNA's presintearje mei ferskillende ekspresjenivo's dan normale sellen.Dêrom kinne tumor-relatearre genen wurde ûndersocht troch differinsjaal hybridisaasje.De ynduksjemetoade kin ek brûkt wurde om de genen te skermjen wêrfan de ekspresje wurdt opwekke.
5. Generaasje en screening fan hybridoma-sellinen?
Spleen B-sellen + myeloma-sellen, foegje polyetyleenglycol (PEG) ta om selfúzje te befoarderjen, en de milt B-myeloma-fúzjesellen groeid yn HAT-medium (befettet hypoxanthine, aminopterin, T) bliuwend útwreidzje.De selfúzje befettet: milt-miltfúzjesellen: net yn steat om te groeien, miltsellen kinne net yn vitro kweekt wurde.Bone-bone-fúzjesellen: kinne hypoxanthine net brûke, mar kinne purine synthesisearje fia it twadde paad mei folate reduktase.Aminopterin inhibit folate reductase en kin dus net groeie.Bone-spleen-fúzjesellen: kinne groeie yn HAT, miltsellen kinne hypoxanthine brûke, en bonkensellen leverje seldielingsfunksje.
6. Wat is it prinsipe en metoade foar it fêststellen fan de primêre struktuer fan DNA troch de dideoxy terminal beëiniging metoade (Sanger metoade)?
It prinsipe is om in nukleotideketenterminator-2,,3,-dideoxynukleotide te brûken om de útwreiding fan DNA te beëinigjen.Om't it de 3-OH mist dy't nedich is foar de foarming fan 3/5 / fosfodiester-obligaasjes, ienris yn 'e DNA-keten opnommen, kin de DNA-keten net fierder útwreide wurde.Neffens it prinsipe fan basepairing, as DNA-polymerase dNMP nedich hat om diel te nimmen oan 'e normaal útwreide DNA-keten, binne d'r twa mooglikheden, ien is om diel te nimmen oan ddNTP, wat resulteart yn it beëinigjen fan deoxynucleotide chain extension;de oare is om mei te dwaan oan dNTP , sadat de DNA-keten noch fierder útwreidzje kin oant de folgjende ddNTP opnommen is.Neffens dizze metoade kin in groep DNA-fragminten fan ferskillende lingten dy't einigje op ddNTP krije.De metoade is om te ferdielen yn fjouwer groepen respektivelik ddAMP, ddGMP, ddCMP, en ddTMP.Nei de reaksje kin polyacrylamidegelelektroforese de DNA-sekwinsje lêze neffens de swimbands.
7. Wat is it positive regulearjende effekt fan aktivatorprotein (CAP) op transkripsje?
Cyclic adenylate (cAMP) receptor protein CRP (cAMP receptor protein), it kompleks foarme troch de kombinaasje fan cAMP en CRP wurdt neamd CAP (cAMPactivated protein).As E. coli groeid wurdt yn in medium dat glukose ûntbrekt, nimt de synteze fan CAP ta, en CAP hat de funksje fan aktivearjen fan promotors lykas laktose (Lac).Guon CRP-ôfhinklike promoters misse de typyske -35 regio-sekwinsjefunksje (TTGACA) dy't mienskiplike promoters hawwe.Dêrom is it lestich foar RNA-polymerase om deroan te binen.De oanwêzigens fan CAP (funksje): kin signifikant ferbetterje de binende konstante fan enzyme en promotor.It toant benammen de folgjende twa aspekten: ① CAP helpt it enzymmolekule om goed te oriïntearjen troch de konformaasje fan 'e promotor en de ynteraksje mei it enzym te feroarjen, om sa te kombinearjen mei de -10-regio en de rol spylje fan it ferfangen fan de funksje fan 'e -35-regio.②CAP kin ek de bining fan RNA-polymerase oan oare plakken yn DNA remme, wêrtroch't de kâns fan bining oan syn spesifike promotor fergruttet.
8. Hokker stappen binne meastentiids opnommen yn in typysk DNA rekombinaasje eksperimint?
in.Ekstrahearje it doelgen (as eksogene gen) fan it donor-organisme, en ferbine it enzymatysk mei in oare DNA-molekule (kloningsvektor) om in nij rekombinant DNA-molekule te foarmjen.b.Ferpleats it rekombinante DNA-molekule yn 'e ûntfangende sel en replikearje en bewarje it yn' e ûntfangende sel.Dit proses wurdt transformaasje neamd.c.Skermje en identifisearje dy ûntfangersellen dy't it rekombinante DNA hawwe opnomd.d.Massakultuer de sellen dy't it rekombinante DNA befetsje om te detektearjen oft it gen foar bûtenlânske help útdrukt wurdt.
9. Konstruksje fan genbibleteek Trije metoaden foar screening fan rekombinanten wurde jûn en it proses wurdt koart beskreaun.
Antibiotika-resistinsjescreening, ynsersjonele ynaktivaasje fan ferset, blau-wyt spot-screening of PCR-screening, differinsjaal screening, DNA-probe De measte klonefektors drage antibiotika-resistinsjegenen (anty-ampicilline, tetracycline).As it plasmide wurdt oerbrocht yn Escherichia coli, sille de baktearjes ferset krije, en dy sûnder oerdracht sille gjin ferset hawwe.Mar it kin net ûnderskiede oft it is reorganisearre of net.Yn in fektor dy't twa fersetgenen befettet, as in frjemd DNA-fragmint yn ien fan 'e genen ynfoege wurdt en feroarsaket dat it gen ynaktivearre wurdt, kinne twa plaatkontrôles mei ferskate medisinen brûkt wurde om te skermjen foar positive rekombinanten.Bygelyks, it pUC-plasmide befettet it LacZ-gen (kodearjen foar β-galactosidase), dat it chromogene substraat X-gal (5-bromo-4-chloro-3-indole-β-D-galactoside) kin ûntbine om blau te meitsjen, sadat de stam blau wurdt.As it frjemde DNA wurdt ynfoege, kin it LacZ-gen net útdrukt wurde, en de stam is wyt, om de rekombinante baktearjes te skermjen.
10. Ferklearje it basisproses fan it krijen fan transgene bisten troch embryonale stamsellen?
Embryonale stamsellen (ES) binne embryonale sellen tidens embryonale ûntwikkeling, dy't keunstmjittich kinne wurde kweekt en proliferearre en hawwe de funksje fan differinsjaasje yn oare soarten sellen.Kultuer fan ES-sellen: De ynderlike selmassa fan 'e blastozyst is isolearre en kultivearre.Wannear't ES wurdt kweekt yn in feeder-frije laach, it sil differinsjearje yn ferskate funksjonele sellen lykas spieren sellen en N sellen.As kultivearre yn in medium dat fibroblasten befettet, sil ES de differinsjaasjefunksje behâlde.ES kin genetysk manipulearre wurde, en syn differinsjaasjefunksje kin yntegreare wurde sûnder syn differinsjaasjefunksje te beynfloedzjen, wat it probleem fan willekeurige yntegraasje oplost.Yntrodusearje eksogene genen yn embryonale stamsellen, ymplantearje dan yn 'e uterus fan swangere froulike mûzen, ûntwikkelje ta welpen, en krúsje om homozygote mûzen te krijen.
