Plant Total RNA Isolation Kit Totaal RNA Purificaiton Kit foar plant leech yn polysaccharides en polyfenolen
Spesifikaasjes
50 Preps, 200 Preps
De kit brûkt de spinkolom en formule ûntwikkele troch Foregene, dy't effisjint hege suverens en heechweardich totale RNA kin ekstrahearje út ferskate plantweefsels mei lege polysacchariden en polyphenole ynhâld.Foar plantmonsters mei hege ynhâld fan polysacchariden of polyfenolen, wurdt it oanrikkemandearre om Plant Total RNA Isolation Plus Kit te brûken om bettere resultaten fan RNA-ekstraksje te krijen.De kit leveret de DNA-Cleaning-kolom dy't genomysk DNA maklik kin fuortsmite fan 'e supernatant en weefsellysate.RNA-allinich kolom kin RNA effektyf bine.De kit kin in grut oantal samples tagelyk ferwurkje.
It hiele systeem befettet gjin RNase, sadat it suvere RNA net degradearre wurdt.Buffer PRW1 en Buffer PRW2 kinne derfoar soargje dat it krigen RNA net kontaminearre is troch proteïne, DNA, ioanen en organyske ferbiningen.
Kit komponinten
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-frije ddH2O, DNA-reinigingskolom |
| RNA-Allinnich Kolom |
| Ynstruksjes |
Funksjes & foardielen
■ Operaasje by keamertemperatuer (15-25 ℃) troch it hiele proses, sûnder iisbad en sintrifugering by lege temperatuer.
■ Folsleine kit RNase-Free, gjin soargen oer RNA-degradaasje.
■ DNA-Cleaning Column bynt spesifyk oan DNA, sadat de kit kin fuortsmite genomic DNA fersmoarging sûnder taheakjen DNase.
■ Hege RNA-opbringst: RNA-allinich Kolom en unike formule kinne RNA effisjint suverje.
■ Snelle snelheid: maklik te betsjinjen en kin binnen 30 minuten foltôge wurde.
■ Feiligens: gjin organysk reagens is nedich.
■ Hege kwaliteit: De suvere RNA-fragminten binne fan hege suverens, frij fan proteïne en oare ûnreinheden, en kinne foldwaan oan ferskate downstream eksperimintele tapassingen.
Kit applikaasje
It is geskikt foar de winning en suvering fan totale RNA út farske of beferzen plant weefsel samples (benammen farske plant leaf weefsel) mei lege polysaccharide en polyphenol ynhâld.
Wurk flow
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ferwurke 50mg farske blêden fan polysaccharides en polyphenols, en 5% suvere RNA waard hifke troch elektroforese.
1: banaan
2: gyk
3: wol
4: granaatappel
Opslach en shelf libben
De kit kin wurde opslein foar 12 moannen by keamertemperatuer (15-25 ℃) yn droege omjouwing, en 2-8 ℃ foar langere tiid (24 moannen).
Buffer PSL1 kin wurde opslein by 4 ℃ foar 1 moanne nei it tafoegjen fan 2-hydroxy-1-ethanethiol (opsjoneel).
Probleem Analysis Guide
De folgjende analyze fan 'e problemen dy't jo kinne tsjinkomme ynPlant TotaalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
De spin kolom is ferstoppe
Blokkearje fan 'e spinkolom sil feroarsaakje dat de RNA-opbringst fermindere wurdt of sels net kin wurde suvere om RNA te krijen, en de kwaliteit fan' e krigen RNA sil leech wêze.
Algemiene oarsaak Analyse:
1. De stekproef is net folslein brutsen.
Unfolsleine samplefragmentaasje kin de DNA-reinigingskolom blokkearje, wat ek de RNA-opbringst en -kwaliteit kin beynfloedzje.Wy riede oan dat by it útfieren fan sample-fragmentaasje, fluch yn genôch hoemannichten floeibere stikstof grindje om de weefsels lykas selmuorren en selmembranen fan 'e samples safolle mooglik te brekken.Foar plantmonsters fan polyfenolpolysacchariden riede wy oan dat jo Plant Total RNA Isolation Kit Plus brûke.
2.Aspireare de DNA-reinigingskolom isolearre supernatant, aspirearje de mooglike selpúnpellet.
Aspirated cell debris pellet kin ferstoppe de RNA-allinich Kolom tidens RNA adsorption prosedueres (sjoch stap 5 fan proseduere, stap 6 fan de polysaccharide polyphenol proseduere).Wy riede oan dat foarsichtigens moat wurde nommen by it aspirearjen fan dizze supernatant om foar te kommen dat selpún wurdt aspirearre.
3. It earste bedrach fan stekproef is te grut.
Oermjittich gebrûk fan samples sil resultearje yn ûnfolsleine monsterfragmintaasje of ûnfolsleine lysis fan sellen troch Buffer PRL1 of Buffer PSL1, wat resulteart yn in ferstoppe suveringskolom foar suveringsoperaasjes.Plant Total RNA Isolation Kit hat in earste maksimum fan 50 mg per inkele suvering fan in eksploitearre stekproef.Foar plantmonsters fan polyfenolpolysacchariden riede wy oan dat jo de Plant Total RNA Isolation Kit Plus besykje.
4. De temperatuer fan 'e sintrifuge is te leech.
Isolaasje en suvering fan hiele RNA, útsein floeibere stikstof fersteuring fan monsterweefsel, wurde alle stappen útfierd by keamertemperatuer (20-25 °C).Guon sintrifuges mei lege temperatueren hawwe temperatueren ûnder 20 °C, wat blokkades kin feroarsaakje yn 'e DNA-skjinende kolom en / of RNA-allinich kolom.As dit bart, set de sintrifuge temperatuer op 20-25 ° C en pre-warm it lysis mingsel en / of de tafoeging fan ethanol ôfskieding supernatant nei 37 ° C.
Gjin RNA ekstrahearre of RNA-opbringst is leech
D'r binne meastentiids in protte faktoaren dy't de effisjinsje fan herstel beynfloedzje, lykas: sample RNA-ynhâld, operaasjemetoade, it elueringsvolumint, ensfh.
Analyse fan mienskiplike oarsaken as hjirûnder:
1.In iis bad of lege temperatuer (4 ° C) centrifugation waard útfierd tidens de operaasje.
Suggestje: Operearje by keamertemperatuer (15-25 ° C) yn it hiele proses, net dwaan iis bad en lege temperatuer centrifugation.
2.It RNA is degradearre troch ferkeard behâld fan it stekproef of lange termyn behâld fan it stekproef.
Oanrikkemedaasje: Freshly sammele samples moatte fluch beferzen wurde yn floeibere stikstof, en dan opslein by -80 ° C foar in lange tiid, foarkomme werhelle freezing en thawing fan gebrûk;of fuortdaliks soak de monsters yn RNA stabilisator RNAlater oplossing (dieremonsters).
3.Net genôch samplefragmentaasje en lysis liede ta blokkearjen fan 'e suveringskolom.
Suggestje: By it slypjen fan it weefsel, soargje asjebleaft dat it weefsel genôch gemalen is, en oerdrage it fluch nei de foarôf tare Buffer PSL1 (befêstigje dat it juste oanpart fan β-ME is tafoege, sjoch stap 1 fan 'e proseduere).
4.De eluent is ferkeard tafoege.
Suggestje: Soargje derfoar dat RNase-Free ddH2O wurdt drippe yn 'e midden fan' e suvering kolom membraan.
5.De krekte folume fan absolute ethanol waard net tafoege oan Buffer PSL2 of Buffer PRW2.
Suggestje: Folgje asjebleaft de ynstruksjes, foegje it juste folume fan absolute ethanol ta oan Buffer PSL2 en Buffer PRW2 en mingje goed foardat de kit wurdt brûkt.
6.It bedrach fan weefselmonster is net geskikt.
Suggestje: Brûk 50 mg weefsel per 500 μl buffer PSL1.It brûken fan tefolle weefsel sil de hoemannichte ekstraktearre RNA ferminderje en de suverens fan 'e resultearjende RNA sil ek wurde fermindere.Wy riede sterk oan dat de earste sample dosage net mear as 50 mg per RNA ekstraksje operaasje.
7. Inappropriate elueringsvolumint of ûnfolsleine eluaasje.
Suggestje: It eluentvolumint fan 'e suveringskolom is 50-200 μl;as it elueringseffekt net befredigjend is, is it oan te rieden om de tiid by keamertemperatuer te ferlingjen nei it tafoegjen fan foarferwaarme RNase-Free ddH2O, lykas 5-10min.
8.De suveringskolom hat ethanol-residu nei it waskjen mei Buffer PRW2.
Suggestje: As de lege buis foar 1 min sintrifuge is en d'r noch ethanol oerbliuwt nei it wassen yn Buffer PRW2, kinne jo de tiid fan 'e lege buis-sintrifugaasje ferheegje nei 2 min, of pleats de suveringskolom by keamertemperatuer foar 5 min om de oerbliuwende ethanol folslein te ferwiderjen.
9.De kit waard ferkeard brûkt.
Suggestje: Foar plantmonsters fan polyfenolyske polysaccharides, mei gebrûk fan gewoane kits lykas Plant Total RNA Isolation Kit kinne miskien net ideale RNA-monsters krije.Wy riede jo oan om Plant Total RNA IsolationKit Plus te brûken, dat spesjaal is ûntworpen foar polyphenolyske polysaccharide-plantmonsters.In kit spesjaal ûntwikkele foar it ekstrahearjen fan RNA út polyfenol- en polysaccharide-plantmonsters.
OD260/OD280 wearde is leech
RNA eluaasje mei ddH2O en brûkt foar spektrofotometer-lêzingen resultearret yn lege OD260 / OD280-wearden.Wy advisearje it brûken fan 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (ynstee fan RNase-frije ddH)2O om RNA te elueren) om relatyf korrekte OD260 / OD280-wearden te krijen, sjoch "RNA-konsintraasje- en suveringsassays" op side 19.
It suvere RNA wurdt degradearre
De kwaliteit fan suvere RNA is relatearre oan faktoaren lykas monsterbehâld, RNase-fersmoarging en manipulaasje.
Analyse fan mienskiplike oarsaken:
1.Tissue samples waarden net opslein yn 'e tiid nei kolleksje.
Oanrikkemedaasje: As de weefselmonsters net op 'e tiid nei it sammeljen wurde brûkt, bewarje se asjebleaft yn floeibere stikstof by lege temperatuer fuortendaliks of oerdrage se nei -80 ° C foar opslach op lange termyn nei fluch befriezen yn floeibere stikstof, of dompelje de samples fuortendaliks yn RNA-stabilisator RNAlater oplossing (diermonsters ).Foar RNA-ekstraksje, besykje nij sammele weefselmonsters te brûken.
2.Repeated freezing en thawing fan weefsel samples.
Suggestje: By it opslaan fan weefselmonsters is it it bêste om se yn lytse stikjes te snijen foar behâld, en in diel dêrfan út te nimmen by it brûken fan se om de degradaasje fan RNA te foarkommen troch werhelle befriezen en ûntdooijen fan 'e samples.
3.RNase wurdt yntrodusearre yn 'e operaasje keamer of net droegen wegwerphandschoenen, maskers, ensfh.
Suggestje: RNA-ekstraksje-eksperiminten wurde it bêste útfierd yn aparte RNA-operaasjes, en de laboratoariumtafel moat foar it eksperimint skjinmakke wurde, en wegwerphandschoenen en maskers moatte wurde droegen tidens it eksperimint om RNA-degradaasje te foarkommen feroarsake troch de ynfiering fan RNase yn 'e grutste mjitte.
4.De reagens is kontaminearre troch RNase by gebrûk.
Suggestje: Ferfange mei in nije searje fan plant totale RNA-ekstraksjekits foar relatearre eksperiminten.
5.De sintrifuge buizen en pipette tips dy't brûkt wurde foar RNA-manipulaasje binne kontaminearre mei RNase.
Suggestje: Soargje derfoar dat de centrifuge buizen, pipette tips, pipetten, ensfh brûkt yn RNA ekstraksje binne allegear RNase-Free.
Ynstruksje hânboeken:
