Ynlieding:

RNA, wittenskiplike namme ribonucleic acid, syn ôfkoarting komt fan RiboNucleic Acid, is in soarte fan nucleic acid foarme troch ferbinen op syn minst tsientallen ribonucleotides fia phosphodiester obligaasjes.

It útgongspunt fan it ferkennen fan RNA is om fersmoarging-frije Totaal RNA te ekstrahearjen, en it basisprinsipe fan RNA-ekstraksje kin rûchwei as folget wurde gearfette:

1. Fersteure de sellen earst

2. Ferwiderje dan makromolekulêre ûnreinheden (aaiwiten, lipiden, DNA, ensfh.)

3. Uteinlik wurdt it RNA precipitearre by it fuortheljen fan sâlten en organyske solvents, en it RNA fierder te suverjen

Ferline en oanwêzich fan ekstraksjemetoade

De earste generaasje fan RNA-ekstraksjemetoade is de TRIzol-ôfslachmetoade (reagenzjes dy't brûkt wurde ûnder oaren guanidine isothiocyanate, fenol, chloroform, ensfh.) útfûn troch in pake neamd Piotr Chomczynski en beppe Nicoletta Sacchi, om't dizze útfining RNA-ekstraksje mooglik makket Fluch en maklik, sûnt doe begûn de upsurge fan RNA.

Letter ferkocht Pake dit oktroai oan Invitrogen, en Invitrogen promovearre dizze metoade oan 'e wrâld en waard in soad brûkte metoade.

Letter waard Invitrogen oernaam troch Thermo!

Representative produkt: Invitrogen syn TRIzol reagens

De TRIzol-ôfslachmetoade fereasket lykwols meardere delslach en ekstraksje fan RNA, en de brûkte reagenzjes binne toskysk en duorje in lange tiid om te operearjen.

Dêrom kaam de twadde generaasje kolom-enzyme suvering metoade yn wêzen, mei help fan silica gel membraan as in spesifyk nucleic acid adsorption materiaal te maksimalisearjen it herstel fan RNA yn de stekproef wylst it fuortsmiten fan oare ûnreinheden.

De twadde generaasje metoade simplifies de operaasje op basis fan stabile prestaasjes, ferleget de risiko faktor, en ferbetteret de effisjinsje fan RNA-ekstraksje.

Representative produkten: QIAGEN RN Maklik en meast ynlânske produkten

Sawol de metoaden fan 'e earste as twadde generaasje fereaskje it gebrûk fan DNase om DNA-fersmoarging te ferwiderjen, wat wat oerlêst bringt foar folgjende streamôfwerts eksperiminten.Residuele DNase sil de effisjinsje fan omkearde transkripsje ferminderje en de earste-string cDNA-synthese ferminderje, wêrtroch de krektens fan 'e resultaten beynfloedzje.

Dêrom wurdt de tredde generaasje ekstraksjemetoade optimalisearre op basis fan 'e twadde generaasje.It eksperimint hoecht gjin enzymen ta te foegjen, en RNA kin maklik wurde krigen mei mar twa kolommen.

Kolom 1: DNA-reinigingskolom om DNA te wiskjen

Kolom 2: Kolom allinich foar RNA adsorbearret en herstelt spesifyk RNA

Sa'n ienfâldige operaasje besparret net allinich tiid, mar fasilitearret ek de wurking fan streamôfwerts eksperiminten!

Representative produkten: QIAGEN RNeasy Plus enFoarigeRNA suvering rige produkten

（RNeasy Plus）

(Foregene'sPlant Total RNA Isolation Kit）

Sis it dy stil!De RNA-kit fan Foregene presintearret ek in super maklik te brûken RNase Eraser, dy't 400μg RNase yn 1 minút folslein kin ferwiderje op it fêste oerflak, sûnder giftige stoffen ta te foegjen oan it minsklik lichem!

Pic1: Operational proses ferliking chart

De produkten fan Foregene kinne RNA-ekstraksje foltôgje yn mar twa ferskes, meitsje oaren net jaloersk op jo foarútgong fan it eksperimint!

Pic2:Experimental resultaten ferliking chart

De earste generaasje (1: TRIzol)

De twadde generaasje (2: RNeasy fan QIAGEN)

De tredde generaasje (3: QIAGEN's RNeasy plus, 4: Foregene)

Pic3: qPCR-grafyk (grafyk foar amplifikaasjekromme)

De earste generaasje (grien betsjut TRIzol -, read betsjut TRIzol +)

De twadde generaasje (himelblau betsjut QIAGEN RNeasy-, read betsjut QIAGEN RNeasy +)

De tredde generaasje (blau betsjut QIAGEN RNeasy plus, grien betsjut Foregene)

(Opmerking: qPCR-grafyk "-" jout oan dat DNase net tafoege is en DNA-fersmoarging net fuortsmiten is. Dêrom is de CT heger en it resultaat is net krekt; "+" jout oan dat DNase is tafoege en de DNA-fersmoarging is fuorthelle, it resultaat is krekt)

Elke technyske upgrade betsjut dat de eksploitaasje fan it eksperimint yn in ienfâldiger en mear brûkerfreonlike rjochting ûntwikkelet.

Foregene is fan doel om mear wittenskiplike ûndersikers te helpen eksperimintele tiid en kosten te besparjen, eksperimintele resultaten fan hege kwaliteit te krijen, en tegearre mear weardefolle wittenskiplike ûndersyksprestaasjes te meitsjen.