Auteurs: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Ienheid: Jiaozhou Sikehûs, Dongfang Sikehûs ferbûn oan Tongji University

Op it stuit is it haadmonstertype foar it opspoaren fan respiratorypathogen nukleïnsûr keel swab.Der binne in protte soarten fan faak brûkte sample behâld oplossings, dy't allegearre moatte wurde gekoeld of beferzen foar ferfier en opslach;It is lestich om it heule proses fan lege temperatuer te kontrolearjen tidens it sammeljen en ferfierproses, en it is lestich om de kwaliteitskontrôle te garandearjen foardat sample testen^[1-2].

RNase (RNase) is in endonuklease dy't RNA hydrolyseart, benammen phosphodiester-bannen tusken nukleotiden skiedt.De RNase molekule is hiel stabyl, der binne disulfide obligaasjes yn 'e struktuer, en syn aktiviteit fereasket gjin oanwêzigens fan divalente kationen, dus RNase is net maklik denatured, en it is maklik om te renaturearjen sels nei hege temperatuer of it brûken fan denaturants.RNases wurde ferdield yn endogenous en exogenous.De endogene RNases kinne tagelyk frijlitten wurde as sellen brutsen wurde.Dêrom is it eliminearjen fan de rol fan endogene RNases in heul krityske stap yn it RNA-ekstraksjeproses.Exogene RNases binne wiidferspraat.RNases besteane yn 'e loft, minsklike hûd, hier en speeksel, dy't wichtige redenen binne foar de maklike degradaasje fan RNA^[3].

Data query

CANS-CL02-A009 "Tapassing fan rjochtlinen foar medyske laboratoariumkwaliteit en kompetinsjeakkreditaasje op it mêd fan molekulêre diagnoaze" yn 'e technyske easken stelt foar dat passende wetterkwaliteitsnormen moatte wurde formulearre neffens de applikaasje;Wegwerp luchtdichte konteners:

RNase / Klassifikaasje

(1) RNase A

Ribonuklease A (RNase A), ôflaat fan bovine panko's, is in endoribonuklease dy't spesifyk it 3'-ein fan pyrimidineresten op RNA kin oanfalle, cytosine of uracil troch neistlizzende nukleotiden foarme.Fosfodiesterbân, it einprodukt fan 'e reaksje is in 3'-pyrimidine-nukleotide en in oligonucleotide mei in 3'-pyrimidine-nukleotide oan 'e ein.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) is ôflaat fan Aspergillus orjzae, it wurket spesifyk op it 3'-terminale fosfaat fan guanine, en de spaltingside is tusken it 3'fosfaat fan guanine en de 5'hydroxyl fan neistlizzende nukleotiden.It einprodukt fan 'e reaksje is 3'guanylic acid en oligonucleotide fragminten mei 3'guanylic acid oan 'e ein.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) waard foar it earst ûntdutsen út kealthymusweefsel, en it kodearjende gen is yn Escherichia coli klone.It kin DNA spesifyk degradearje: RNA-strengen yn RNA-hybride-duplexen, wat resulteart yn oligonukleotiden en mononukleotiden mei 3'-OH en 5'-monofosfaat-einen, it kin net ien- of dûbelstrengige DNA of RNA degradearje.

RNase

Funksje en gebrûk

Ribonuclease kin de degradaasje fan ribonucleic acid (RNA) katalysearje en kin keunstmjittich synthesisearre wurde.Medisinale salve wurdt topysk brûkt om trauma en gewrichtspine te behanneljen.Neffens rapporten kin ribonuklease it metabolisme fan hostsel feroarje, firussynthese ynhibearje, de proliferaasje fan grypfirus yn vitro remme, en de formaasje fan faksinia en herpesvirus yn kipembryo's remme.Klinysk gebrûk fan ribonuclease deistige intramuscular ynjeksje fan 180 mg, foardielich foar de behanneling fan epidemyske encephalitis, ribonuclease kin catalyze de degradaasje fan ribonucleic acid (RNA), en kin no wurde keunstmjittich synthesized.Medisinale salve wurdt topysk brûkt om trauma en gewrichtspine te behanneljen.Neffens rapporten kin ribonuklease it metabolisme fan hostsel feroarje, firussynthese ynhibearje, de proliferaasje fan grypfirus yn vitro remme, en de formaasje fan faksinia en herpesvirus yn kipembryo's remme.Klinysk gebrûk fan ribonuclease deistige intramuscular ynjeksje fan 180 mg is foardielich foar de behanneling fan epidemyske encephalitis.

RNase

Inhibitor Definysje

Definysje fan RNase-ynhibitor-ienheid: De hoemannichte enzyme dy't nedich is om 50% fan 'e aktiviteit fan 5ng RNase A te remmen is ien ienheid.

Hoe RNase-ynhibitoren wurkje

Guanidine isothiocyanate:

Guanidine isothiocyanate is in organyske ferbining mei de molekulêre formule C2H6N4S.Benammen brûkt yn biologyske medisinen, gemyske reagents, ensfh Guanidine isothiocyanate is in protein lysing agent, en it wurdt faak brûkt as de wichtichste komponint fan lysis oplossing yn molekulêre diagnostyske reagents.It kin weefsel lyse, selstruktuer ferneatigje en nukleïnesûr dissoziearje fan nukleoprotein, en hat sterke denaturaasje nei RNase.It is de meast effektive RNase-ynhibitor op it stuit.

TRIzol is in nij totaal RNA-ekstraksje-reagens dat it totale RNA direkt kin ekstrahearje út sellen as weefsels.It befettet stoffen lykas fenol en guanidine isothiocyanate, dat kin fluch fersteure sellen en inhibit nucleases frijjûn troch sellen.

(It guanidine isothiocyanate is lykwols gefaarlik foar de sûnens fan laboratoariumûndersikers.)

RNasin:

Acid glycoprotein extracted út rat lever of minsklik blastoderm.Rnasin is in net-kompetitive ynhibitor fan RNase, dy't kin bine oan ferskate RNases om se te ynaktivearjen.

(Mear details: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hhege temperatuer:

Hege temperatuer is ek in mienskiplik middel fan proteïne-denaturaasje.

Diethylpyrocarbonate (DEPC):

DEPC is in sterke, mar ûnfolsleine RNase-ynhibitor, dy't RNase-aktiviteit kin remme troch te kombinearjen mei de aminosoeren imidazolring fan 'e RNase-aktive groep om aaiwiten te denaturearjen.

Vanadyl ribonucleoside kompleks:

In kompleks foarme troch vanadiumokside-ionen en nukleosiden, dy't bynt oan RNase yn 'e foarm fan oergongsstoffen, dy't de aktiviteit fan RNase hast folslein remme kinne

oar:

SDS, urea, diatomaceous ierde, ensfh hawwe ek in bepaalde remmende effekt op RNase.

Expert Resinsjes

Li Yujie Chief Technician

Direkteur fan Laboratory Department, Jiaozhou Sikehûs, Dongfang Sikehûs ferbûn oan Tongji University

Om de biologyske ôfbraak fan eksogene RNase te foarkommen, moatte maskers, wanten en hoeden faak wurde droegen en ferfongen tidens it RNA-ekstraksjeproses.Alle glêswurk moat wurde bakt yn in droege oven op 200 ° C foar mear as 2 oeren.Materialen brûkt foar bakken, lykas plestik, moatte wurde behannele mei DEPC wetter, en dan wosken mei destillearre wetter.De reagentia as apparaten brûkt foar ekstraksje, behâld en identifikaasje fan RNA moatte wijd wurde oan RNA, en in ûnôfhinklik RNA-operaasjegebiet moat wurde ynsteld.

referinsjes:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Baktearjes en firussen yn 'e nasopharynx fuortendaliks foarôfgeand oan it begjin fan akute legere respiratoire ynfeksjes yn ynheemse Australyske bern [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Sikehûs Ynfeksje Control Branch fan Sineeske Previntive Medicine Association.Rjochtlinen foar it sammeljen en ynspeksje fan klinyske mikrobiele eksimplaren [J].Sineesk Journal of Hospital Ynfeksje, 2018 (20): 3192-3200.

[3] "Klinyske test tsientûzen wêrom molekulêre biology testvolume"