Brûke jo noch Trizol om RNA te ekstrahearjen?
Gosh, lit my gjin soargen meitsje oer jo sûnens!
Trizol stiet op it punt om marginalisearre te wurden, sis my net dat jo noch yn it tsjuster binne?

De wichtichste komponint fan Trizol-reagens is fenol, en organyske reagentia lykas chloroform wurde ek tafoege yn 'e eksperimintele operaasje.Eksposysje op lange termyn sil skea oan jo sûnens feroarsaakje, benammen direkte hûdkontakt kin slimme gemyske brânwûnen en permaninte littekens feroarsaakje.

Under normale omstannichheden kinne de laboratoariumpartners de gefaren allinich ferminderje troch harsels folslein te bewapenjen (laborjassen, wanten en maskers te dragen).

En myn advys oan jo is: ferfange Trizol asjebleaft direkt om skea fan 'e boarne te foarkommen.

1. It earste generaasje produkt fan RNA-ekstraksje
Kom út yn 1987 (Trizol reagents)

foardiel:
Mear folsleine ekstraksje

Neidielen:
Toxyske reagentia lykas guanidine isothiocyanate-phenol-chloroform binne nedich;
Omslachtige operaasje;
Moatte DNase brûke om DNA-fersmoarging te ferwiderjen

2.It twadde generaasje produkt fan RNA-ekstraksje
Kom út yn 1994 (QIAGEN RNeasy en meast ynlânske produkten)

foardiel:
Kolom centrifugal metoade wurdt oannommen, dat is maklik te betsjinjen;

Neidiel:
Moatte sintrifugerje om weefselôffal te ferwiderjen
Moatte DNase brûke om DNA-fersmoarging te ferwiderjen

3.It tredde generaasje produkt fan RNA-ekstraksje
Komt út yn 2005 (QIAGEN RNeasy Plus en ForegeneRNA suveringssearje produkten)

foardiel:
Brûk direkt DNA-ferwideringskolom om DNA en weefselôffal tagelyk te ferwiderjen, tiid en muoite te besparjen;
Feilich en handich, it is net nedich om filterkolom en DNase ta te foegjen om ûnreinheden maklik te ferwiderjen en DNA-fersmoarging te foarkommen

Litte wy nei de operasjonele ferskillen sjen tusken it produkt fan 'e earste generaasje (Trizol), it produkt fan' e twadde generaasje (RNeasy) en it produkt fan 'e tredde generaasje (Foregene) fan RNA-ekstraksje:

De operaasje yn 'e figuer is dúdlik: it tredde generaasje produkt hat dúdlike foardielen

Krekt trije wurden om te beskriuwen: maklik!Fluch!Feilichheid

De PK-kaart fan 'e eksperimintele resultatenfoarde earste-generaasje, twadde-generaasje en tredde-generaasje produkten fan RNA-ekstraksje:

1. Electrophoretogram

De earste generaasje (1: Trizol)
De twadde generaasje (2: QIAGEN RNeasy)
De tredde generaasje (3: QIAGEN RNeasy plus, 4: Foarige)

Hokker soarte produkt is goed, sille jo witte troch ferliking
RNA ekstrahearre mei it Foregene-kit
Net allinich hege konsintraasje, mar ek goede yntegriteit

2.qPCR-grafyk (grafyk foar amplifikaasjekromme)

De earste generaasje (Trizol)

De twadde generaasje (himelblaubetsjutQIAGEN RNeasy-, readbetsjutQIAGEN RNeasy +)

De tredde generaasje (blau betsjut Foregene, grien betsjut QIAGEN RNeasy plus)

(Opmerking: De twadde-generaasje QIAGEN RNeasy fan qPCR-grafyk betsjut dat de kit gjin DNase tafoegje en gjin DNA-fersmoarging ferwideret. Dêrom is de CT heger en it resultaat is net krekt; QIAGEN RNeasy + betsjut dat DNase is tafoege en de DNA-fersmoarging is fuorthelle, en it resultaat is krekt)

Oft it no in elektroforetogram is as in kwantitative PCR-amplifikaasjekrommegrafyk, de kwaliteit fan Foregene-produkten is net minder as bûtenlânske ymporteare produkten.