Direkte PCR is in reaksje dy't direkt dier- of plantweefsels brûkt foar amplifikaasje sûnder ekstraksje fan nukleïnesûr.Op in protte manieren wurket direkte PCR lykas gewoane PCR

It wichtichste ferskil is de oanpaste buffer brûkt yn direkte PCR, de stekproef kin direkt ûnderwurpen wurde oan de PCR reaksje sûnder nucleic acid ekstraksje, mar der binne oerienkommende easken foar de tolerânsje fan de enzymen en de komptabiliteit fan de buffer belutsen by de direkte PCR reaksje.

Hoewol d'r mear of minder PCR-ynhibitoren binne yn mienskiplike samples, kin direkte PCR noch betroubere amplifikaasje berikke ûnder de aksje fan enzymen en buffers.De tradisjonele PCR-reaksje fereasket heechweardige nukleinsäure as sjabloan, dy't de glêde foarútgong fan PCR-reaksje kin remme as it sjabloan aaiwiten en oare ûnreinheden befettet.Direkte PCR is op it stuit ien fan 'e populêrste technologyen op it mêd fan molekulêre diagnostyk.

01 Direct PCR waard oarspronklik brûkt foar bist en plant

De ierste tapassing fan direkte PCR is op it mêd fan bisten en planten, lykas it bloed, weefsel en hier fan 'e rat, kat, kip, knyn, skiep, fee, ensfh., Planteblêden en sieden, ensfh.

Dizze fjilden hawwe wat mienskiplike skaaimerken, dat is, de doelgenynhâld is relatyf heech en nukleïnesûrwinning is lestich, dus direkte PCR kin net allinich tiid besparje en in lytse ynfloed hawwe op 'e resultaten, mar ek kosten besparje.

Direkte PCR brûkt foar deteksje fan patroanen is in kwestje fan 'e lêste jierren, guon PCR-reagensfabrikanten hawwe in protte ynspanningen dien yn dizze rjochting by it meitsjen fan ynnovaasje.Benammen yn dizze COVID-19-epidemy binne in protte soksoarte deteksjeprodukten op 'e merke ferskynd, lykas SARS-CoV-2 Nucleic Acid Detection Kit (Multiplex PCR Fluorescent Probe Method) ûndersocht en ûntwikkele troch Foregene, dy't Real-time RT PCR-technology (rRT-PCR) brûkt foar kwalitative deteksje fan SARS-Coopharynge- as swan-sûrge- of swan-sûrge- of swab-monstermonster. s.

Foregene is ien fan 'e bedriuwen dy't Direct PCR-technology brûke, foar de deteksje fan normale ORF1ab, N, E, enfariant lineages nucleic soeren yn minsklike nasopharyngeal of oropharyngeal swab samples lykas SARS-CoV-2 B.1.1.7 lineage (UK), B.1.351 lineage (ZA), B.1.617 lineage (IND) en P.1 lineage (BR).

02  Reagentia nedich foar direkte PCR

Foarbyld fan Lysate

De stekproef lysate kin wurde konfigurearre troch josels of kocht.It ferskil yn 'e gearstalling fan ferskillende merken fan lysate sil meitsje de lysing fermogen oars, en dan sil de lysing tiid in bytsje oars.Bygelyks, foar de tarieding fan monsters fan dierweefsel, wurdt 30 minuten of oernachtich lysis algemien oanrikkemandearre, en de lysis-oplossing foar firussen farieart fan 3-10 minuten.

PCR mastermix

It is oan te rieden om hot-start DNA-polymerase te brûken om spesifike amplifikaasje te ferbetterjen en it amplifikaasjefermogen te ferheegjen.De kearn fan direkte PCR is in tige tolerante polymerase.

Eliminearje of remme komponinten yn 'e stekproef dy't ynfloed hawwe op DNA-amplifikaasje

Neidat de stekproef wurdt ferwurke mei de lysate, aaiwiten, lipiden en oare sel ôffal wurde frijlitten, dizze stoffen sille inhibit de PCR reaksje.Dêrom fereasket direkte PCR de tafoeging fan oerienkommende ferwidering of ynhibitoren om de ynfloed fan dizze faktoaren te ferminderjen.

03  In samling fan fiif kennispunten fan direkte PCR

Earst is Direct PCR-technology in direkte PCR-technology foar ferskate biologyske samples.Under dizze technyske betingst is d'r gjin needsaak om it nukleïnesûr te skieden en te ekstrahearjen, it weefselmonster direkt te brûken as it objekt, en de doelgen-primers tafoegje om de PCR-reaksje út te fieren.

Twad, Direct PCR technology is net allinnich in tradisjonele DNA template amplification technology, mar ek omfiemet RNA template reverse transcription PCR.

Tredde, Direct PCR technology net allinnich direkt útfiert routine kwalitative PCR reaksjes op weefsel samples, mar ek omfiemet Real-Time qPCR reaksjes, dat fereasket de reaksje systeem te hawwen sterke anty-eftergrûn fluorescence ynterferinsje kapasiteit en endogene fluorescence quenchers de antagonistyske fermogen.

Fjirde, de samples rjochte troch de Direct PCR technology allinnich nedich de frijlitting fan nucleic acid sjabloanen, en net fuortsmite aaiwiten, polysaccharides, sâlt ioanen, ensfh dy't ynterferearje mei de PCR reaksje.Wat fereasket de nucleic acid polymerase en PCR Mix yn it reaksje systeem te hawwen poerbêst ferset en oanpassingsfermogen om te soargjen enzyme aktiviteit en replikaasje krektens ûnder komplekse omstannichheden.

Fyfde, it weefsel sample rjochte troch Direct PCR technology sûnder nucleic acid ferriking behanneling en it bedrach fan sjabloan is hiel lyts, dat fereasket de reaksje systeem te hawwen ekstreem hege gefoelichheid en amplification effisjinsje.