It treflike skaaimerk fan 'e PCR-reaksje is syn grutte amplifikaasjekapasiteit en ekstreem hege gefoelichheid.Om PCR-prestaasjes en detectie-effisjinsje te ferbetterjen, sette wy ús yn foar it ferbetterjen fan de PCR-amplifikaasjekapasiteit en deteksjesensitiviteit, mar de hoofdpijn is yn it proses fan it eksperimint.Falske posityfen komme faak foar, en in heul lyts bedrach fan stekproeffersmoarging as PCR-produktkontaminaasje kin falske posityfen yn it eksperimint feroarsaakje.
Fiif soarten PCR-produktfersmoarging
D'r binne in protte redenen foar PCR-fersmoarging, dy't rûchwei kinne wurde ferdield yn 'e folgjende kategoryen:
Specimen fersmoarging wurdt benammen feroarsake troch de fersmoarging fan 'e kontener foar it sammeljen fan it eksimplaar, of as it eksimplaar pleatst wurdt, wurdt it út' e kontener lekt fanwegen losse sealing, of it eksimplaar wurdt oan 'e bûtenkant fan' e kontener hechte, dy't krúskontaminaasje feroarsaket;Kontaminaasje liedt ta kontaminaasje tusken eksimplaren;guon mikrobiele eksimplaren, benammen firussen, kinne ferspriede mei aerosolen of foarmje aerosolen, wat resulteart yn ûnderlinge fersmoarging.
De wichtichste reden is dat tidens de tarieding fan PCR-reagenzjes, it monstergewear, kontener, dûbeldestillearre wetter en oare oplossingen wurde fersmoarge troch it PCR-nukleïnezuursjabloan.
Yn molekulêre biology laboratoaria en guon laboratoaria dy't gebrûk meitsje fan cloned plasmids as positive kontrôles, it probleem fan cloned plasmid kontaminaasje is ek mienskiplik.Om't de ynhâld fan cloning plasmide yn ienheid folume is frij heech, en mear ark en reagents binne nedich yn de suvering proses, en it plasmide yn libbene sellen is tige wierskynlik te wurde fersmoarge fanwege de sterke groei en reproduksje fermogen fan libbene sellen.
De kontaminaasje fan fersterke produkten is it meast foarkommende kontaminaasjeprobleem yn PCR-reaksjes.Omdat de kopy kwantiteit fan PCR produkt is grut (algemien 1013 kopyen / ml), dat is fier heger as de limyt fan PCR detection kopy oantal, in hiel lyts bedrach fan PCR produkt fersmoarging kin feroarsaakje falske posityf.
Aerosolfersmoarging is de meast wierskynlike foarm fan fersmoarging fan PCR-produkten, en it is ek it maklikste om te oersjen.It wurdt foarme troch de wriuwing tusken it floeibere oerflak en de loft.Yn 't algemien kin aerosolfersmoarging wurde foarme as it deksel wurdt iepene, as it monster wurdt aspirearre, of sels as de reaksjebuis krêftich wurdt skodde.Neffens berekkeningen kin in aerosolpartikel 48.000 eksimplaren befetsje, sadat de fersmoarging dêrtroch in probleem is dat spesjaal omtinken fertsjinnet.
Benammen testlaboratoria brûke faak itselde pear primers om in bepaald gen te testen.Yn 'e rin fan' e tiid sil in grutte hoemannichte PCR-produktkontaminaasje foarkomme yn 'e laboratoariumromte.Sadree't sa'n fersmoarging optreedt, is it dreech om it yn koarte tiid te eliminearjen.
Foar de earste trije soarten fersmoarging kinne wy effektive middels brûke om te foarkommen, mar de fersmoarging feroarsake troch PCR-produkten is dreech te foarkommen, benammen yn 'e bou fan net-standert PCR-laboratoaren.Yn it PCR-proses, as de pipettepunt de floeistof sûget en blaast, en de PCR-buisdeksel wurdt iepene, sil in aerosol wurde foarme.De DNA-molekulen dy't troch de aerosol droegen wurde (ien aerosol kin tsientûzenen DNA drage) binne dreech te eliminearjen om't se yn 'e loft driuwe.Sadree't de folgjende ronde fan PCR-eksperiminten wurde yntrodusearre, sille falske positiven ûnûntkomber foarkomme.
Lykas werjûn yn 'e ôfbylding hjirûnder, fersterke de negative kontrôle ek de oerienkommende band fan belang:
It earste diel fan dit probleem fan PCR-fersmoarging en previnsje wurdt hjir yntrodusearre.It folgjende nûmer sil jo it twadde diel bringe "Previnsje fan kontaminaasje fan PCR-produkten", dus bliuw op 'e hichte!
Post tiid: Jul-25-2017
