Fêstigje PCR-eksperimint SOP om it gedrach fan eksperimintpersoniel te standardisearjen.
De eksperimintator hâldt him strikt oan de operaasjeprosedueres, en minimalisearret de PCR-fersmoarging dy't kin wurde feroarsake troch minsklike faktoaren of foarkomt it foarkommen fan fersmoarging.Derneist moat de eksperimintator de korrespondearjende profesjonele kennis en feardigens hawwe, ynklusyf feardigens yn it operearjen fan relatearre apparatuer, it ferdúdlikjen fan it heule wurkproses, behearsking fan 'e behannelingmetoaden fan kontaminaasje en metoaden foar laboratoariumkwaliteitskontrôle, en kinne de testresultaten korrekt ynterpretearje.
Stel in standert PCR-laboratoarium yn.
PCR-laboratoarium is yn prinsipe ferdield yn fjouwer gebieten, nammentlik reagens-tariedingsgebiet, sampleferwurkingsgebiet, amplifikaasjegebiet, en amplifikaasjeproduktanalysegebiet.De earste twa gebieten binne pre-amplification gebieten, en de lêste twa gebieten binne post-amplification gebieten.De pre-amplification sône en de post-amplification sône moatte wurde strang skieden.Eksperimintele materialen, reagents, opname papier, pennen, skjinmeitsjen materialen, ensfh, kin allinnich streame út de pre-amplification gebiet nei it post-amplification gebiet, dat is, út reagent tarieding gebiet → sample ferwurkjen gebiet → amplification gebiet → amplification produkt analyze gebiet, en moat net streame efterút .De luchtstream yn it laboratoarium moat ek streame fan it pre-amplifikaasjegebiet nei it post-amplifikaasjegebiet, en net efterút streame.It ideale PCR-laboratoariumûntwerp wurdt hjirûnder werjûn:
Figure A: Ideale PCR laboratoarium opset modus mei negative druk yn de buffer keamer
Figure B: Ideale PCR laboratoarium opset modus mei positive druk yn de buffer keamer
De PCR-laboratoariumopsetdiagrammen jûn yn figuer A en figuer B moatte in mear ideale opsetmodus wêze, en it laboratoarium mei betingsten kin ferwize nei dizze modus foar ûntwerp.Foar gewoane laboratoaren is it oan te rieden dat it PCR-amplifikaasjegebiet en it produktanalysegebiet kinne wurde skieden, en de iepening fan 'e dekking moat safolle mooglik fermindere wurde yn it sample-tariedingsgebiet en it PCR-amplifikaasjegebiet.Unthâld: Produkten en eksperimintele foarrieden yn it produktanalysegebiet binne strang ferbean om te nimmen nei it gebiet foar tarieding fan monsters en PCR-amplifikaasjegebiet.
As it laboratoarium allinich PCR-deteksje en identifikaasje útfiert, wurdt it oanrikkemandearre om fluorescent kwantitative PCR te brûken ynstee fan konvinsjonele PCR.
Fluorescence kwantitative PCR detection resultaten kinne wurde sammele en analysearre troch fluorescence sinjalen, dus it is net nedich om te iepenjen it deksel foar elektrophoresis nei de reaksje, dy't foarkomt de PCR produkt fersmoarging feroarsake troch it lekken fan reaksje produkten te foarmjen aerosolen.As jo it oantal pet-iepeningen ferheegje tidens de ladenstap fan gelelektroforese, sil aerosolfersmoarging wierskynlik foarkomme.It is oan te rieden om de tapassing fan kwantitative PCR te befoarderjen en kwalitative PCR stadichoan te ferfangen.
It UNG anty-PCR-produktkontaminaasjesysteem wurdt brûkt foar de PCR-reaksje.
It systeem brûkt dUTP ynstee fan dTTP.Nei de PCR-reaksje wurde alle PCR-produkten (DNA-fragminten) opnommen mei dUTP;yn 'e folgjende ronde fan PCR-reaksje wurdt it UNG-enzyme tafoege oan it systeem 5 minuten foar PCR by 37 ° C ynkubeare foar PCR, dy't spesifyk alle DNA-fragminten dy't dUTP befetsje kinne degradearje en dan PCR-reaksje útfiere.Dit kin de aerosolfersmoarging dy't feroarsake wurdt troch PCR-produkten folslein fuortsmite.It effekt wurdt werjûn yn 'e ôfbylding hjirûnder:
Opmerking: Foar de direkte PCR-searje kinne jo de searjeprodukten kieze fan it anty-PCR-produktkontaminaasjesysteem fan ForegeneSuggest
Foar laboratoaria dy't grutskalige genotypingstesten útfiere, wurdt it sterk oanrikkemandearre om it UNG anty-PCR-produktkontaminaasjesysteem te brûken foar it testen fan reagenzjes neist de bou fan ridlike laboratoaria.
Herinnering: It gebrûk fan dit systeem kin de PCR-produktkontaminaasje dy't al feroarsake is net fuortsmite.Dêrom moat it UNG-systeem wurde brûkt oan it begjin fan 'e oanbelangjende test, en it UNG-systeem moat wurde brûkt foar PCR-amplifikaasje, om de kontaminaasje fan PCR-produkten False positive te foarkommen.
It is oan te rieden om it Direct PCR-UNG-systeem fan Foregene te brûken by it útfieren fan grutskalige testen, lykas:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Dizze searje kits fan Foregenekin net allinnich útfiere PCR detection fluch en op in grutte skaal, mar ek effektyf foarkomme en kontrolearje PCR produkt fersmoarging.
Post tiid: Mar-19-2021
