Hoefolle witte jo

Oer Nekstraksje fan ucleic acid

It begjin en ein fan suvere nucleic acid

Alles is lestich oan it begjin, suvere nucleic acid is it meast

Inisjatyf fan molekulêre eksperiminten, foar folgjende eksperiminten

Súkses as mislearring hat in krúsjale ynfloed.

Trace / ultra-trace UV-spektrofotometer wurdt favorisearre troch in protte wittenskiplike ûndersikers, om't it nukleïnesûrkonsintraasje en proteïne- en sâltionresiduen ienfâldich, fluch en ekonomysk kin detectearje.

Lykas wy allegear witte, betsjut A260 nukleïnesûrabsorbens OD-wearde, A280 betsjut proteïnekonsintraasje-absorbens OD-wearde, A230 betsjut sâltionkonsintraasje-absorbens OD-wearde, dus A260 kin nukleïnesûrkonsintraasje konvertearje, A260/280 betsjut proteïnresidu, A260/230 betsjut sâltionresidu, mar dit is gewoan in regel ûntdutsen troch ûndersikers basearre op in, en it is gewoan in regel ûntdutsen.konvinsjonele” om te leauwen dat it de suverens fan DNA en RNA kin ferklearje oanin bepaalde mate.It is net de ienige standert foar de identifikaasje fan nucleic acid opbringst en suverens, it wurdt allinnich brûkt as referinsje, en it is net in "gouden standert".

De Thermo Fisher ND-2000 hantlieding beklammet de betrouberens fan 'e testresultaten

De reden is dat de resultaten krigen troch it brûken fan in mikro / ultramicro UV spektrofotometer allinne wjerspegelje de opbringst en suverens fan nucleic soer fan 'e kant, en der binne in protte beynfloedzjende faktoaren (optysk paad, sample folume, sample konsintraasje, pH wearde, oare ioanen dy't beynfloedzje absorbance mjitting, ensfh), de mjitten OD wearde is net needsaaklikerwize akkuraat.Tagelyk, fanwege it gebrek oan spesifisiteit fan it materiaal foar bepaling fan absorbance wearde, single-strâne DNA, dûbele-strâne DNA, RNA, dNTPs, en guon aaiwiten allegearre hawwe absorption peaks op 260nm golflingte, en de konsintraasje bepaald troch A260 allinnich is net needsaaklikerwize de echte DNA of RNA.Konsintraasje, en har yntegriteit en degradaasje kinne net beoardiele wurde.

Dus hoe beoardielje de kwaliteit fan ús suvere nukleïnesûr?Neist it brûken fan in mikro/ultramikro UV-spektrofotometer foar deteksje, binne metoaden lykas agarosegelelektroforese ek nedich om de suverens en yntegriteit fan it nukleïnesûr visueel wer te jaan, en de konsintraasje oant in beskate mjitte oan te jaan.Op dizze manier binne de opbringst en suverens fan nukleïnesûr krigen út 'e deteksjeresultaten fan ferskate metoaden leauwensweardigens.

Eksperimintele chart ferliking

Genomysk DNA fan H1299-sellen waard ekstrahearre mei help fan bedriuw A's DNA-ekstraksje-kits, en signifikante ûnreinensfersmoarging waard sjoen, wat resultearre yn hege OD-wearden

(OD-mjittingswearde en oerienkommende elektroferogram)

Evaluaasje yndeks

Is d'r in "gouden standert" foar nukleïnesûr-opbringst en kwaliteitstests?

Sa fier as wy witte, der is gjin ienfâldige, flugge en goedkeape metoade.Oft it no spektrofotometer, gelelektroforese of massaspektrometry is, se reflektearje allegear de konsintraasje en suverens fan nukleïnesûr yn 'e oplossing út ferskate aspekten, en se moatte wurde beoardiele troch te ferwizen nei elkoar.

De bêste evaluaasje-yndeks is altydde folgjende eksperimintele applikaasje.It hat gjin ynfloed op de effisjinsje fan reverse transkripsje en PCR-amplifikaasje.It heljen fan betroubere amplifikaasjeprodukten en Ct-wearden, en it krijen fan in folsleine sekwinsje troch sequencing is suksesfolle nukleïnsûrekstraksje.

Om gear te lûken, de werjefte fan ratio-allinne teory moat wurde útdage troch de werjefte fan "gebrûk fan goede downstream eksperimintele resultaten as goede ekstraksje parameters"!

Oanrikkemandearre Foregene DNA RNA-ekstraksjekits om hege DNA / RNA-suverheid te krijen:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/