Ferskate revolúsjonêre útfinings yn 'e skiednis fan deteksjetechnology yn myn tinzen binne immunolabelingtechnology basearre op it prinsipe fan antigeen-antibody spesifike bining, PCR technology en sequencing technology.Hjoed sille wy prate oer PCR technology.Neffens de evolúsje fan PCR-technology ferdiele minsken gewoanlik PCR-technology yn trije generaasjes: gewoane PCR-technology, real-time fluorescent kwantitative PCR-technology en digitale PCR-technology.
Common PCR technyk
KARY MULLIS (1944.12.28-2019.8.7)
Kary Mullis betocht de polymerase kettingreaksje (polymerase chain reaction , PCR) yn 1983. Der wurdt sein dat doe't er syn freondinne ried, hy ynienen in flits fan ynspiraasje hie en tocht oan it prinsipe fan PCR (oer de foardielen fan riden).Kary Mullis waard bekroane mei de Nobelpriis foar Skiekunde yn 1993. De New York Times kommentearre: "Hiel orizjineel en wichtich, hast biology te dielen yn pre-PCR en post-PCR-tiidrek.
It prinsipe fan PCR: Under de katalysis fan DNA-polymerase wurdt de memmestring-DNA brûkt as sjabloan, en de spesifike primer wurdt brûkt as it útgongspunt fan útwreiding, en de dochterstreng DNA komplemintêr oan 'e memmestring-sjabloan DNA wurdt in vitro kopiearre troch denaturaasje, annealing, útwreiding en oare stappen.It is in DNA-synthese-amplifikaasjetechnology in vitro, dy't elk doel-DNA yn vitro fluch en spesifyk kin fersterkje.
Foardielen fan gewoane PCR
1.Klassike metoade, folsleine ynternasjonale en ynlânske noarmen
2.Legere kosten fan ynstrumint reagents
3.PCR-produkten kinne wurde weromfûn foar oare molekulêre biologyske eksperiminten
Oanrikkemandearre Foregene PCR-masine: https://www.foreivd.com/foreamp-sn-695-series-thermal-cycler-96-wells-pcr-machine-product/
Related produkten: https://www.foreivd.com/pcr-herotm-with-dye-product/
Neidielen fan gewoane PCR
1.maklik te fersmoargjen
2.omslachtige operaasje
3.allinnich kwalitative analyze
4.Matige gefoelichheid
5.D'r is net-spesifike amplifikaasje, en as de net-spesifike band deselde grutte is as de doelband, kin it net te ûnderskieden wurde
Capillary electrophoresis-basearre PCR
Yn reaksje op de tekoartkommingen fan gewoane PCR, guon fabrikanten hawwe yntrodusearre ynstruminten basearre op it prinsipe fan capillary electrophoresis.De elektroforesestap nei PCR-amplifikaasje is foltôge yn 'e kapillair.De gefoelichheid is heger, en it ferskil fan ferskate bases kin wurde ûnderskieden en de amplification kin wurde berekkene troch MAERKER.produkt ynhâld.It neidiel is dat de PCR produkt noch moat wurde iepene en set yn it ynstrumint, en der is noch in grut risiko fan besmetting.
CapillaryElectrophoresis
2. Real-time fluorescent kwantitative PCR (Quantitative Real-time PCR, qPCR) technologyFluorescent kwantitative PCR, ek wol Real-Time PCR neamd, is in nije nucleic acid kwantitative technology ûntwikkele troch PE (Perkin Elmer) yn 1995. De ûntwikkelingsskiednis fan fluorescent kwantitative PCR is in skiednis fan siel-roerjende striid fan reuzen lykas ABI, Roche, en Bio-Rad.As jo ynteressearre binne, kinne jo it kontrolearje.Dizze technyk is op it stuit de meast folwoeksen en wiid brûkte semi-kwantitative PCR-technyk.
Oanrikkemandearre qPCR-masine: https://www.foreivd.com/mini-real-time-pcr-system-forequant-sf2sf4-product/
Fluorescent kleurstofmetoade (SYBR Green I):SYBR Grien I is de meast brûkte DNA-binende kleurstof foar kwantitative PCR, dy't net-spesifyk bynt oan dûbelstrengs DNA.Yn 'e frije steat emittearret SYBR Green swakke fluoreszinsje, mar ienris bûn oan dûbelstrengige DNA, nimt de fluoreszinsje 1000-fâldich ta.Dêrom is it totale fluorescent sinjaal útstjoerd troch in reaksje proporsjoneel mei de hoemannichte dûbele strân DNA oanwêzich en sil tanimme mei de tanimming fan fersterke produkt.Om't de kleurstof net-spesifyk bynt oan dûbelstrenged DNA, kinne falsk positive resultaten wurde generearre.
Related products: https://www.foreivd.com/real-time-pcr-easytm-sybr-green-i-kit-product/
Fluorescent probe metoade (Taqman technology): TidensPCR-amplifikaasje, in spesifike fluorescent probe wurdt tagelyk tafoege as in pear primers.De sonde is in lineêre oligonukleotide, mei in fluorescent reportergroep en in fluorescent quencher-groep respektivelik oan beide einen markearre.As de sonde is yntakt, de fluorescent sinjaal útstjoerd troch de reporter groep wurdt opnomd troch de quencher groep, en de deteksje Der is gjin fluorescent sinjaal;tidens PCR-amplifikaasje (yn 'e útwreidingsstadium) sil de 5'-3' Dicer-aktiviteit fan Taq-enzyme de sonde fertarje en degradearje, sadat de reporter-fluorescentgroep en de quencher-fluorescentgroep skieden wurde, sadat it fluorescence-monitorsysteem It fluorescent sinjaal kin wurde ûntfongen, dat is, elke kear as in DNA-ketting wurdt fersterke, de folsleine molekulaasje fan de fluorescent wurdt fersterke, dy ulaasje fan fluorescent sinjalen en de formaasje fan PCR-produkten.Taqman-sondemetoade is de meast brûkte deteksjemetoade yn klinyske deteksje.
Related products: https://www.foreivd.com/quickeasy%e1%b5%80%e1%b4%b9-real-time-pcr-kit-taqman-product/
Foardielen fan qPCR
1.De metoade is folwoeksen en de stypjende apparatuer en reagentia binne kompleet
2.Medium kosten fan reagents
3.maklik te brûken
4.Hege deteksjesensitiviteit en spesifisiteit
Neidielen fan qPCR
De mutaasje fan it doelgen liedt ta miste deteksje.
It deteksjeresultaat fan sjabloan mei lege konsintraasje kin net bepaald wurde.
D'r is in grutte flater by it brûken fan de standertkromme foar kwantitative deteksje.
3. Digital PCR (digitale PCR, dPCR) technology
Digitale PCR is in technyk foar de absolute kwantifikaasje fan nukleïnesûrmolekulen.Yn ferliking mei qPCR kin digitale PCR it oantal DNA / RNA-molekulen direkt lêze, dat is de absolute kwantifikaasje fan nukleïnesûrmolekulen yn 'e startmonster.Yn 1999 stelden Bert Vogelstein en Kenneth W. Kin-zler it konsept fan dPCR formeel foar.
Yn 2006 wie Fluidigm de earste dy't in kommersjeel chip-basearre dPCR-ynstrumint produsearre.Yn 2009 lansearre Life Technologies de OpenArray en QuantStudio 12K Flex dPCR-systemen.Yn 2013 lansearre Life Technologies it QuantStudio 3DdPCR-systeem, dat nanoskaal mikrofluïdyske chiptechnology mei hege tichtheid brûkt om samples gelijkmatig te fersprieden nei 20.000 yndividuele sellen.yn de reaksje goed.
Yn 2011 lansearre Bio-Rad it droplet-basearre QX100 dPCR-ynstrumint, dat wetter-yn-oaljetechnology brûkt om it stekproef gelijkmatig te fersprieden nei 20.000 druppelwetter-yn-oalje, en brûkt in druppelanalysator om de druppels te analysearjen.Yn 2012 lansearre RainDance it RainDrop dPCR-ynstrumint, dreaun troch gas mei hege druk, om elk standert reaksjesysteem te ferdielen yn in reaksje-emulsie mei 1 miljoen oant 10 miljoen mikrodruppels op pikoliternivo.
Oant no hat digitale PCR twa grutte fraksjes foarme, chiptype en druppeltype.Gjin saak hokker soarte fan digitale PCR, syn kearnprinsipes binne beheinen verdunning, einpunt PCR en Poisson distribúsje.De standert PCR reaksje systeem befettet nucleic acid sjabloanen is gelyk ferdield yn tsientûzenen PCR reaksjes, dy't wurde ferdield oan chips of microdroplets, sadat eltse reaksje befettet safolle mooglik in sjabloan molekule, en in single-molecule template PCR reaksje wurdt útfierd.Troch it lêzen fan de fluorescence De oanwêzigens of ôfwêzigens fan it sinjaal wurdt teld, en de absolute kwantifikaasje wurdt útfierd nei kalibraasje fan de statistyske Poisson ferdieling.
De folgjende binne de skaaimerken fan ferskate digitale PCR-platfoarms dy't ik haw brûkt:
1. Bio-Rad QX200 droplet digitale PCR Bio-RadQX200 is in heul klassyk digitaal PCR-platfoarm, it basisdeteksjeproses: 20.000-samples wurde generearre troch de druppelgenerator Water-in-oalje mikrodruppels wurde fersterke op in gewoane PCR-masine, en op it lêst wurdt it fluoreszinsjesinjaal fan elke mikrodruppel lêzen troch in mikrodruppellêzer.De operaasje is komplisearre, en it risiko fan fersmoarging is medium.
Xinyi TD1 mikrodruppel digitale PCRXinyi TD1 is in ynlânske digitaal PCR-platfoarm, it basisdeteksjeproses: generearje 30.000-50.000 wetter-yn-oaljedruppels troch in druppelgenerator, fersterkje op in mienskiplik PCR-ynstrumint, en úteinlik trochjaan De druppellêzer lêst it fluorescent sinjaal fan elke druppel.Sawol druppelgeneraasje as lêzen yn dit platfoarm wurde útfierd yn in tawijd chip mei in leech risiko fan kontaminaasje.
STILLA Naica mikro-druppel chip digitale PCRSTILLA Naica is in relatyf nij digitaal PCR-platfoarm.It basisdeteksjeproses is: foegje de reaksjeoplossing ta oan 'e chip, set de chip yn it mikrodruppelgeneraasje- en amplifikaasjesysteem, en generearje 30.000 mikrodruppels.Spried op 'e chip, en PCR-amplifikaasje is foltôge op' e chip.Dan wurdt de fersterke chip oerbrocht nei it analysesysteem foar mikrodruppellêzen, en it fluorescent sinjaal wurdt lêzen troch foto's te nimmen.Om't it hiele proses plakfynt yn in sletten chip, is it risiko op fersmoarging leech.
4. ThermoFisher QuantStudio 3D chip digitale PCR
ThermoFisher QuantStudio 3D is in oar klassike chip-basearre digitale PCR-platfoarm.It basale deteksjeproses is: foegje de reaksje-oplossing ta yn 'e spreader, en ferspried de reaksje-oplossing gelijkmatig op' e chip mei 20.000 microwells troch de spreader., set de chip op 'e PCR-masine om te fersterkjen, en op it lêst set de chip yn' e lêzer en nim in foto om it fluorescent sinjaal te lêzen.De operaasje is relatyf yngewikkeld, en it hiele proses wurdt útfierd yn in sletten chip, en it risiko fan fersmoarging is leech.
5. JN MEDSYS Clarity chip digitale PCR
JN MEDSYS Clarity is in relatyf nij chip-type digitaal PCR-platfoarm.It basale deteksjeproses is: foegje de reaksjeoplossing ta yn 'e applicator, en ferspried de reaksje-oplossing evenredich oer 10.000 PCR-buizen fêst yn' e PCR-buis troch de applicator.Op 'e mikroporeuze chip komt de reaksjeoplossing yn' e chip troch kapillêre aksje, en de PCR-buis mei de chip wurdt op 'e PCR-masine pleatst foar amplifikaasje, en úteinlik wurdt de chip yn' e lêzer set om it fluorescent sinjaal te lêzen troch in foto te nimmen.De operaasje is komplisearre.It risiko op besmetting is leech.
De parameters fan elk digitaal PCR-platfoarm wurde as folget gearfette:
De evaluaasje-yndikatoaren fan it digitale PCR-platfoarm binne: it oantal spjalte ienheden, it oantal fluorescentkanalen, de kompleksiteit fan operaasje en it risiko fan kontaminaasje.Mar it wichtichste is de krektens fan deteksje.Ien manier om digitale PCR-platfoarms te evaluearjen is om meardere digitale PCR-platfoarms te brûken om inoar te ferifiearjen, en in oare manier is om standertstoffen te brûken mei krekte wearden.
Foardielen fan dPCR
1.It berikken fan absolute kwantifikaasje
2.Hegere gefoelichheid en spesifisiteit
3.Kin lege kopy-samples detectearje
Neidielen fan dPCR1. Djoere apparatuer en reagenzjes 2. Yngewikkelde operaasje en lange deteksjetiid 3. Smel deteksjeberik
Op it stuit, de trije generaasjes fan PCR technology hawwe harren eigen foardielen en neidielen, en elk hat syn eigen applikaasje fjilden, en it is net in relaasje dat de iene generaasje ferfangt de oare.De trochgeande foarútgong fan technology hat nije fitaliteit yn PCR-technology ynjeksje, wêrtroch it de iene tapassingsrjochting nei de oare kin ûntsluten, wat nukleïnsûrdeteksje handiger en krekter makket.
Boarne: Dr. Yuan nimt jo mei foar testen
Oanrikkemandearre produkten:
Post tiid: Nov-18-2022
