PCR-masine|Begripe jo it echt?

Nobelpriiswinnende PCR-technology

Yn 1993 krige de Amerikaanske wittenskipper Mulis de Nobelpriis foar Skiekunde, en syn prestaasje wie de útfining fan PCR-technology.De magy fan PCR-technology is yn 'e folgjende skaaimerken: As earste is de hoemannichte DNA te fersterkjen ekstreem lyts, en teoretysk kin ien molekule brûkt wurde foar amplifikaasje;twadde, de amplification effisjinsje is heech, en it bedrach fan it doel gen is eksponinsjele.Amplification, mear as 10 miljoen kear yn in pear oeren.No is it PCR-ynstrumint in protte brûkt yn libbenswittenskiplik ûndersyk en in protte oare aspekten.

Ferskillende modellen en fabrikanten fan thermyske fytsers kinne ferskate prestaasjes en werhelling sjen litte.Dizze ferskillen beynfloedzje net allinich PCR-effisjinsje, mar ek de krektens en konsistinsje fan krigen gegevens.Begryp fan PCR-masjinefunksjes kin ús helpe om it sukses fan ús eksperiminten te maksimalisearjen.

Heating module

De krektens fan 'e temperatuer fan' e termyske fytser kin beslissend wêze foar it sukses of mislearjen fan PCR.Goed-to-well temperatuer konsistinsje op it ferwaarming blok is ek kritysk te krijen betroubere en reproducible PCR resultaten.

Ien manier om thermyske krektens te garandearjen is om faak te testen mei temperatuerferifikaasjekits en opnij te kalibrearjen as nedich troch in oplaat profesjonele.Tests foar temperatuerferifikaasje wurde typysk brûkt om:

Goed-to-well krektens relatyf oan ynstelde temperatuer yn isothermyske modus

Well-to-well krektens relatyf oan ynstelde temperatuer nei temperatuerkonverzje

Heat Lid Temperatur Accuracy

Primer Annealing Temperatur Control

Gradienttemperatuerkontrôle is in funksje fan it PCR-ynstrumint dat de optimalisaasje fan primer-annealing yn PCR fasilitearret.It doel fan de gradient ynstelling is te berikken wikseljende temperatueren tusken modules, en troch ≥2 ° C temperatuer opkomst en falle tusken elke kolom, ferskillende temperatueren kinne wurde hifke tagelyk te krijen de optimale primer annealing temperatuer.Teoretysk berikt in wiere gradient lineêre temperatuer tusken modules.

Konvinsjonele thermyske fytsers mei gradient brûke lykwols gewoanlik ien thermysk blok en kontrolearje de temperatuer troch twa ferwaarming- en koeleleminten oan beide úteinen, wat faak resultearret yn 'e folgjende beheiningen:

Allinich twa temperatueren kinne wurde ynsteld: de hege en lege temperatueren foar primer annealing wurde ynsteld oan beide úteinen fan de termyske module, en krekte ynstelling fan oare temperatueren kin net berikt wurde tusken modul

Troch de waarmte-útwikseling tusken de ferskate kolommen is de temperatuer tusken ferskate regio's op 'e module mear kâns om in sigmoidale kromme te folgjen as in echte lineêre gradient.

Sample temperatuer

It fermogen fan 'e termyske fytser om de temperatuer fan' e sample te kontrolearjen is heul wichtich foar de krektens fan 'e PCR-resultaten.Instrument-spesifike parameters lykas oprit tariven, hold tiden, en algoritmen binne kritysk foar it foarsizzen fan sample temperatuer.

De snelheid fan ferwaarming en koeling fan 'e PCR-masine betsjut dat de temperatuer feroaret tusken PCR-stappen dy't oer in bepaalde perioade foarkomme.Om't it in bepaalde tiid duorret foar de waarmte om fan 'e module nei it stekproef oer te bringen, sil de eigentlike ferwaarming en koeling fan' e stekproef stadiger wêze.Dêrom moat de definysje fan temperatuerferoaringssnelheid wurde ûnderskieden en begrepen.

De maksimum of peak module oprit taryf stiet foar de fluchste temperatuer feroaring dat de module kin berikke oer in hiel lyts perioade fan tiid tidens de oprit.

De gemiddelde blok ramp taryf stiet foar it taryf fan temperatuer feroaring oer in langere perioade fan tiid en sil foarsjen in mear represintative mjitte fan PCR masine snelheid.

De maksimale sample ferwaarming en koeling taryf en de gemiddelde sample ferwaarming en koeling taryf wjerspegelje de werklike temperatuer krigen troch it stekproef.It taryf fan sample ferwaarming en koeling sil soargje foar in krekter ferliking fan de prestaasjes fan 'e PCR masine en syn potinsjele ynfloed op PCR resultaten.

By it útfieren fan in cyclerferfanging wurdt it oanrikkemandearre om in ynstrumint te brûken mei in programma foar ramprate dat de foarige modus simulearret foar makliker ferfanging en minimale ynfloed op PCR-repetabiliteit.

De termyske cycler moat wurde ûntworpen om allinich stappen te timen nei't it monster de ynstelde temperatuer berikt.Op dizze manier sil de tiid dat it stekproef wurdt hâlden op 'e ynstelde temperatuer krekter wurde hanthavene mei de korrespondearjende syklusbetingsten nedich yn' e operaasjeproseduere.

Termyske fytsers brûke faak komplekse wiskundige algoritmen om te soargjen dat samples fluch in ynstelde temperatuer kinne berikke neffens in ynsteld programma.Op grûn fan it folume fan it reaksjesysteem en de dikte fan it brûkte PCR-plestik kin it algoritme de temperatuer fan 'e stekproef foarsizze en de tiid dy't it sil nimme om de ynstelde temperatuer te berikken.Op grûn fan dizze algoritmen, tidens it ferwaarmings- of koelingsproses fan 'e thermyske cycler, sil de bloktemperatuer meastentiids de ynstelde wearde oerstekke troch in proses neamd thermyske blokovershoot of undershoot.Sa'n opset soarget derfoar dat it monster sa gau mooglik de ynstelde temperatuer berikt sûnder sels te oersjitten of te ûndersjitten.

Eksperimintele trochslach

Faktoaren dy't de trochstreaming fan in thermyske fytser kinne fergrutsje omfetsje rampraten, thermyske blokkonfiguraasjes, en yntegraasje fan automatisearringsplatfoarms.

De ferwaarming en koeling taryf fan de termyske cycler stiet foar de snelheid wêrop it berikt de ynstelde temperatuer.Hoe flugger de temperatuer opkomt en falle, hoe flugger de PCR sil rinne, wat betsjut dat mear eksperiminten yn in bepaalde perioade foltôge wurde kinne.Dêrnjonken kinne eksperiminten fersneld wurde troch flugger DNA-polymerasen te brûken.

It ûntwerp fan 'e termyske cyclermodule is ek krúsjaal foar PCR-eksperiminten.Bygelyks, replaceable modules tastean fleksibiliteit yn it oantal samples per run.Derneist binne ferwaarmingsmodules mei yndividueel regelbere modules ideaal foar it útfieren fan ferskate PCR-programma's tagelyk op ien termyske cycler.

Foar automatisearre PCR mei hege trochfier moat de software dy't it pipetting-ôfhannelingssysteem kontrolearret, programmearber en kompatibel wêze moatte.Automatisearre systemen binne ideaal foar it útfieren fan PCR-reaksjes mei hege trochset, om't se kontinu rinne kinne mei in bytsje minsklike yntervinsje, wêrtroch't de tiid nedich is foar manuele eksperimintele opset en it fergrutsjen fan it oantal reaksjes yn in opjûne tiidperioade.

Betrouberens, duorsumens en kwaliteitsfersekering fan termyske fytsers

Neist prestaasjes en trochfiermooglikheden moat de PCR-masine ek beskate werhelle gebrûk, miljeu-stress en ferstjoerbetingsten kinne wjerstean.Guon fabrikanten kinne rapportearje oer hoe't it ynstrumint betrouberens en duorsumenstests útfiert.De oerienkommende PCR-ynstrumintdeteksje omfettet:

Betrouberens: Mechanyske rigs wurde brûkt om werhelle testen út te fieren op faak brûkte ynstrumintkomponinten lykas thermyske deksels, kontrôlepanielen / touchscreens, en temperatuerfytsmodules.

Omjouwingsdruk: Omjouwingskeamers kinne brûkt wurde om ferskate omstannichheden fan routine eksperiminten te simulearjen, lykas temperatuer, fochtigens.

Shipping Testing: Intense skok- en trillingstests kinne wurde útfierd neffens International Safety Shipping Association noarmen om te garandearjen dat it ynstrumint kin oankomme yn ûnbeskeadige wurkomstannichheden.

Garânsje en tsjinst foar it behâld fan de PCR masine

Nettsjinsteande strange betrouberens en duorsumenstests hawwe thermyske fytsers ûnûntkomber technyske problemen oer it libben fan it ynstrumint.Foar gemoedsrêst moatte de garânsje, tsjinst en ûnderhâld fan de fabrikant wurde beskôge by it keapjen fan in ynstrumint.

De fleksibiliteit fan tsjinsten lykas ûnderhâld op it plak / werom nei fabryk, tsjinsten foar kontrôle op ôfstân, en ferfangende ynstruminten yn it ûnderhâldsproses, ensfh., Om de ynfloed op wurkeffisjinsje te ferminderjen.

De lingte fan 'e garânsjeperioade, de omslachtiid fan' e tsjinst, de tagonklikens fan technyske stipe, en de feardichheden fan profesjonele stipepersoniel.

Feasibility fan ynstrumint ynstallaasje, operaasje, gearwurking, en ferifikaasje te foldwaan laboratoarium en relatearre regeljouwing easken.Underhâldstsjinsten lykas temperatuerferifikaasje, testen en kalibraasje binne beskikber om te soargjen dat it ynstrumint goed presteart mei de oerienkommende parameters.

Relatearre produkten: