Koartlyn ûntduts ik wat geweldig!In protte avansearre eksperimintprofessionals om him hinne witte net iens wat heul basale eksperimintele kennispunten.

Kinne jo bygelyks de folgjende fragen beantwurdzje?

Is der in ferskil tusken OD260 en A260?Wat betsjut elk?
OD is de ôfkoarting fan optyske tichtens (optyske tichtens), A is de ôfkoarting fan absorbance (absorbânsje), de twa begripen binne eins itselde, "optyske tichtens" is "absorbânsje", mar "optyske tichtens" is yn oerienstimming mei de measte nasjonale noarmen en mear standerdisearre.

Meastentiids mjitte wy de OD-wearde op 260nm om de nukleïnesûrkonsintraasje te berekkenjen, dus wat stelt 1OD foar?
Nucleic acid hat in maksimale absorption peak op in golflingte fan 260nm, dat befettet sawol DNA as RNA, lykas fragminten nucleic acid fragminten (dit is it kaai punt).
De OD-wearde mjitten op in golflingte fan 260 nm waard opnommen as OD260.As it probleem suver is, kin de OD260-wearde de konsintraasje fan it nukleïnesûrmonster berekkenje.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (dûbelstrengich DNA)
=37 μg/ml ssDNA (single-stringed DNA)
= 40 μg/ml RNA
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleotides)
Is d'r ferbining en ferskil tusken RT-PCR, Realtime-PCR en QPCR?
RT-PCR is koart foar Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, koart foar Quantitative Real Time PCR
Hoewol Real Time PCR (real-time fluorescent kwantitative PCR) en Reverse Transcription PCR (reverse transcription PCR) lykje beide ôfkoarte te wurden as RT-PCR.Mar de ynternasjonale konvinsje is: RT-PCR ferwiist spesifyk nei reverse transcription PCR.

Wat binne de meast brûkte nt, bp, en kb om de lingte fan DNA/RNA yn biology te beskriuwen?
nt = nukleotide
bp = basispaar basispaar
kb = kilobase

Fansels soene jo sizze dat in protte minsken net skele oer dizze lytse details!Elkenien docht dit, en gjinien sil jo freegje wat it is.Jo witte dat dit net nedich is, krekt?

Nee, nee, nee, it is tige nedich om dit te witten!fanwege hokker?
Om't jo in artikel pleatse wolle!Broer!Oft jo fan doel binne ôfstudearjen of prestaasjes fan wittenskiplike ûndersyk neistribbe, jo moatte fertrouwe op artikels om te praten!

Nucleic acid ekstraksje moat it ienfâldichste en meast basale eksperimint wêze.De kwaliteit fan ekstraksje fan nukleïnesoeren bepaalt direkt de resultaten fan folgjende eksperiminten.

Hoewol't ik haw sein it in protte kearen, der binne noch in protte freonen dy't net skele.Dizze kear besleat ik om út it artikel te gean!

Minimum ynformaasje foar publikaasje fan kwantitative Real-Time PCR eksperiminten, oantsjutten as MIQE, is in set fan fluorescence kwantitative eksperimint rjochtlinen lansearre ynternasjonaal, dy't foarstelt minimum noarmen foar de eksperimintele ynformaasje nedich foar it evaluearjen fan fluorescence kwantitative PCR eksperiminten en publisearjen fan artikels.Troch de eksperimintele betingsten en analysemetoaden dy't troch de eksperimintator oanbean wurde, kinne de resinsinten de jildigens fan it eksperimintele skema fan 'e ûndersiker better evaluearje.

It kin sjoen wurde dat yn 'e seksje fan ekstraksje fan nukleïnesûr de folgjende deteksje-items binne foarsteld:

"E" jout ynformaasje oan dy't moatte wurde levere en "D" jout ynformaasje oan dy't moatte wurde levere as nedich.

De foarm is hiel yngewikkeld, yn feite, ik wol sizze dat elkenien moat begjinne út

suverheid (D), opbringst (D), yntegriteit (E) en konsistinsje (E) om Nucleic soeren te evaluearjen yn dizze fjouwer aspekten.

Neffens eksperimintele gewoanten, prate earst oer de evaluaasjemetoaden fan suverens en konsintraasje.

OD-mjitting is de favorite en maklikste deteksjemetoade foar eksperiminten.Wat it prinsipe oangiet, sil ik hjir net yn detail yngean.In protte laboratoaria brûke no ultra-mikrospektrofotometers om nukleïnesûrmonsters direkt kwantitatyf te analysearjen.Wylst it werjaan fan de absorbance wearde, it programma direkt jout de konsintraasje wearde (nucleic acid, protein en fluorescent kleurstof) en relatearre ferhâldingen.As foar de analyze fan de OD wearde, Bewarje dizze foto en do silst wêze goed.

Universele OD wearde oplossing list

D'r binne lykwols in pear warskôgings dy't apart foar jo moatte wurde brocht.

(Ik wit ommers dat jo dejinge moatte wêze dy't sparje en wachtsje oant jo se nedich binne!)

Notysje 1 Equipment

De OD-wearde sil wurde beynfloede troch ferskate apparatuer.Salang't de OD260 binnen in bepaald berik is, binne de wearden fan OD230 en OD280 sinfol.Bygelyks, it absorbânsjeberik fan 'e mienskiplike Eppendorf D30 by 260nm is 0 ~ 3A, en de NanoDrop One fan Thermo is op 260nm.De absorbance berik fan 0.5 ~ 62.5A.

Notysje 2Verdunningsreagens

De OD-wearde kin wurde beynfloede troch de verdunning fan ferskate reagenzjes.Bygelyks, de OD260/280 lêzing fan suvere RNA yn pH7.5 10mM Trisbuffer is tusken 1.9-2.1, wylst ynneutrale wetterige oplossingde ferhâlding sil wêze leger, miskien allinnich 1,8-2,0, mar dit betsjut net dat de kwaliteit fan RNA feroaret Difference.

Notysje 3Reststoffen

It bestean fan oerbliuwende stoffen sil ynfloed hawwe op de krektens fan nukleïnesûrkonsintraasjemjitting, dus it is needsaaklik om proteïne, fenol, polysaccharide en polyphenolresiduen yn nukleïnesûrmonsters safolle mooglik te foarkommen.

Yn feite is ekstraksje mei organyske reagentia in âlde metoade.Yn kommersjele kits, it ekstraksje effekt kin berikt wurde troch in silica-basearre adsorption kolom kombinearre mei centrifugation, it foarkommen fan giftige en skealike organyske reagents dy't dreech te ferwiderjen, ensfh It probleem, lykasForegene's nukleïnezuurekstraksje kit, brûkt gjin DNase / RNase en giftige organyske reagentia yn 'e heule operaasje, rap en feilich, en deeffekt isgoed(sei tafallich dat it keal wie, mar ik wit dat jo it witte wolle).

Foarbyld 1: Opbringst en suverens fan genomyske DNA-ekstraksje

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) behannelet boaiemmonsters út ferskate boarnen, en de hoemannichte en suverens fan genomysk DNA krigen wurde werjûn yn 'e folgjende tabel:
Foarbyld 2: Weefsel-RNA-ekstraksje-opbringst en suverens

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) ferwurke ferskate weefselmonsters, en de hoemannichte en suverens fan RNA krigen wurde werjûn yn 'e tabel hjirûnder (foar mûsweefsel):
Tink lykwols net dat jo klear binne mei de OD-wearde.Hawwe jo wat soargje foar de kaaipunten dy't ik foar jo tekene?

Notysje

Fragmentearre nukleïnesûrmolekulen sille ek wurde berekkene yn 'e absorption.Oannommen dat jo genomyske DNA-residuen yn 'e RNA hawwe, sil jo OD-wearde heul heech ferskine, mar de eigentlike konsintraasje fan RNA kin net bepaald wurde.Oft jo RNA is It is net dúdlik oft der degradaasje is, dus wy hawwe noch in wiidweidige evaluaasjemetoade nedich om in krekter oardiel te jaan, dat is de evaluaasje fan 'e nukleïnesoereintegriteit neamd yn MIQE.