Tips foar it ferbetterjen fan lijmherstel

1. Fergrutsje de sample load ûnder electrophoresis.

2. Brûk freshly tariede electrophoresis buffer.

3. By it knipjen fan lijm, besykje allinich de lijm mei strips te snijen om it folume fan lijm te ferminderjen: gjin lijm nedich mei in pear doelfragminten, oars sil it beynfloedzje op 'e hersteltiid.

4. Nei it smelten fan twa of mear stikjes lijm, brûk in buis nettsjinsteande hoe grut it folume is en ferpleatse it nei deselde kolom.

5. De oplossing tafoege yn 'e sol kin in bytsje mear wêze, wat mear befoarderlik is foar de bining fan DNA oan' e membraan, mar oer it algemien net mear as 750ul.

6. De kaai foar gelwinning is om DNA oan 'e kolom te binen troch de sâltkonsintraasje, acidity (lading) en hydrofobisiteit fan' e oplossing yn 'e kolom.Dêrom, as de pH fan 'e elektroforesebuffer te heech is, kin 10ul (pH 5.0, 3mol / L NaAC) oan' e sol tafoege wurde;om DNA-molekulen op it membraan better te ûnderskeppen, kin 30% isopropanol tafoege wurde om de floeistof te ferwaarmjen nei it oplossen fan de lijm.

7. Foar it tafoegjen fan de eluent, lit de kolom op keamertemperatuer foar in pear minuten (sawat 10 minuten) litte om de ethanol folslein te ferdampen.

8. As lêste, foegje minder eluent ta om it herstelvolume te minimalisearjen.Algemien wurdt 30-50μl eluent brûkt foar eluaasje (net te min, oars sil it net by steat wêze om it membraan wiet te meitsjen, wat net befoarderlik is foar eluaasje);de elueringsdruppels binne yn it sintrum fan it membraan, om it DNA bûn oan it membraan folslein te eluearjen.

9. Nei it tafoegjen fan de eluent kin it yn in wetterbad fan 55-graden foar 5 minuten eluearre wurde of yn in wetterbad fan 50-graden foar mear as 10 minuten pleatst wurde, of fersegele mei in parafilm op 4-graden oernachtich, en dan sintrifuge foar herstel de oare deis, it effekt is goed.

10.Foegje it sintrifugeare eluaat werom nei de adsorpsjekolom en sintrifuge wer.

Detaillearre metoaden en prosedueres foar PCR-produktherstel

1. Gewoane rubber recycling

As jo ​​​​de lijm weromhelje wolle, is it it bêste om in kit te brûken, dat is handich en hat in wat hegere hersteltiid.As jo ​​​​it echt moatte herstellen mei de hân, kinne jo tafoegje 3 kear it folume fan TE nei it snijen fan de lijm.Nei it smelten yn in wetterbad, fenol, fenol / chloroform wurde skjinmakke, en ethanol wurdt delslein.Dat is it.

2. DNA-herstel fan gels mei lege smeltpunt

Reiniging fan DNA-fragminten Add TE (10 mmol / l Tris-HCl pH8.0, 0.1 mmol / l EDTA) lyk oan it folume fan 'e gel, en plak yn in 65 ° C wetterbad foar 5 minuten om de gel folslein op te lossen.

Neidat it waard brocht ta keamertemperatuer, in gelikense bedrach fan phenol (satuere mei TE, TE waard fersegele yn de boppeste laach, en de legere laach fan fenol waard fuortsmiten) waard tafoege, en it mingsel waard sêft mingd (gjin mingde nedich), en centrifuged by 12.000 rpm foar 3 minuten.Werhelje 1-2 kear.

Nim de supernatant, foegje 0,1 folume fan 3mol / L natriumacetat (pH 5,2) en 2,5 kear folume fan absolute ethanol ta om ethanol delslach út te fieren.Los it suvere DNA op mei in passende hoemannichte TE, mjit de ynhâld, en tariede op gebrûk (it kin brûkt wurde foar analyse fan doelgenstruktuer, probe tarieding, ensfh.).

3. PCR herstel mei goede amplification spesifisiteit

As de spesifisiteit fan PCR-amplifikaasje goed is, is it gewoan in ienfâldige suvering en herstel fan it PCR-produkt.Jo kinne 50ug / ml proteinase K tafoegje oan it PCR-produkt, 37 graden foar 1h, ienris ekstrahearje mei phenol / chloroform, ienris ekstrahearje mei chloroform, en 0,1 folume fan 'e supernatant tafoegje.De natriumacetate waard weromfûn troch delslach mei 2,5 voluminten fan absolute ethanol.

Relatearre produkten:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/