Wat is in mRNA faksin
It mRNA-faksin bringt RNA oer nei de sellen fan it lichem om proteïne-antigenen út te drukken en te produsearjen nei relevante oanpassingen yn vitro, wêrtroch it lichem in ymmúnreaksje produsearret tsjin it antigeen, en dêrmei de ymmúnkapasiteit fan it lichem útwreidet[1,3].
Ofbylding 1: Skematysk diagram fan it effekt fan direkte ynjeksje fan mRNA-faksin [2]
Klassifikaasje fan mRNA faksinen
mRNA faksinen wurde ferdield yn twa soarten:net replikearjendmRNA ensels-amplifingmRNA: sels-amplifisearjend mRNA kodearret net allinich it doelantigen, mar kodearret ek de replikaasje dy't yntrazellulêre RNA-amplifikaasje en meganisme foar proteïne-ekspresje mooglik makket.Non-replikearjende mRNA-faksinen kodearje allinich doelantigenen en befetsje 5'en 3'untranslated regio's (UTR).Se leverje wiidweidige stimulearring fan oanpassingsfermogen en oanberne immuniteit, nammentlik in situ antigeen-ekspresje en gefaarsinjaal-oerdracht, en hawwe de folgjende tapassingen Features[2,3]
●Kin wiidweidige stimulearring fan oanpassingsfermogen en oanberne ymmuniteit leverje, nammentlik in situ antigeenekspresje en gefaarsinjaaltransmission
●Kin in "balansearre" ymmúnreaksje oanwize, ynklusyf humorale en sellulêre effektors en ymmúnûnthâld
●Kin ferskate antigenen kombinearje sûnder de kompleksiteit fan faksinfoarming te fergrutsjen
● Trochgeande ferbettering fan ymmúnpotinsjeel kin berikt wurde troch werhelle faksinaasje, en d'r is gjin of in bytsje ymmúnreaksje foar de drager
● Heat stabile mRNA faksinen kinne ferienfâldigje it ferfier en opslach fan faksins
Ofbylding 2: Skematysk diagram fan mRNA-faksin en har antigeen-ekspresjemeganisme [4]
Skaaimerken fan mRNA faksinen
Yn ferliking mei tradisjonele faksins hawwe mRNA-faksinen ienfâldige produksjeprosessen, rappe ûntwikkelingssnelheden, gjin needsaak foar selkultuer, en lege kosten.Yn ferliking mei DNA-faksinen hoege mRNA-faksinen de kearn net yn te gean en d'r is gjin risiko fan yntegraasje yn it gastheargenoom.De heale-libben kin oanpast wurde troch modifikaasje.
Tabel 1: Foardielen en neidielen fan mRNA faksins
|
| Foardiel | Tekoart |
| mRNA faksin | Snelle ûndersyk en ûntwikkeling, faksinproduksje duorret mar 40 dagen | Trigger in ûnnedige ymmúnreaksje
|
| mRNA-ynstabiliteit ûnder fysiologyske omstannichheden, maklik te degradearjen | Sil net yntegrearje yn it genoom om mooglike therapeutyske mutaasjes te foarkommen
| |
| Gjin needsaak foar ien sinjaal foar nukleêre lokalisaasje, transkripsje | De effektiviteit fan 'e feiligenskearn moat noch wurde ferifiearre
|
Figuer 3: Stromdiagram fan mRNA faksin produksje en tarieding [4]
Foregene Viral RNA Isolation kit
RT-qPCR Easy (ien stap)
Ferbettere strategyen foar de tarieding fan mRNA faksins
Fanwegen de minne stabiliteit fan mRNA sels, maklike degradaasje troch nukleasen yn weefsels, lege effisjinsje fan selyngong, en lege oerseteffisjinsje, beheine dizze defekten de tapassing fan mRNA-faksinen.Oerseteffektiviteit spilet ek in tige krityske rol.Leveringsauto's kinne wurde ferdield yn virale vectoren en net-virale vectoren (ynklusyf liposomen, net-liposomen, firussen, nanopartikels, ensfh.).Dêrom binne relevante ferbetteringsmaatregels nedich.It folgjende is in farmakologyske ferbetteringstrategy foar mRNA-tarieding[2]
1 Synthesize cap-analogen of brûk capping-enzymen om mRNA te stabilisearjen en proteïne-oersetting te fergrutsjen troch te binen oan eukaryote translation initiation factor 4E (EIF4E)
2 Pas de eleminten yn 'e 5'-untranslated regio (UTR) en 3'-UTR oan om mRNA te stabilisearjen en proteïne-oersetting te fergrutsjen
3 It tafoegjen fan Poly(A)-sturt kin mRNA stabilisearje en proteïne-oersetting ferheegje
4 Modifisearre nukleosiden om oanberne ymmúnaktivaasje te ferminderjen en oersetting te fergrutsjen
5 Behanneling mei RNase III en snelle proteïne floeistofchromatografy (FPLC) suvering kin ymmúnaktivaasje ferminderje en oersetting ferheegje
6 Optimalisearje sekwinsjes as kodons om oersetting te fergrutsjen
7 Co-levering fan oersettingsinisjaasjefaktoaren en oare metoaden om oersetting en immunogeniciteit te feroarjen
Figuer 4: In vitro transkripsje (IVT) mRNA produksje en assemblage proses [5]
Grutskalige tarieding fan plasmid DNA
Plasmid-DNA-suvering ferwideret benammen kontaminanten lykas RNA, iepen-sirkel DNA-endotoxine, hostprotein en hostnukleinsûr, en feroaret normaal rekombinant plasmid yn E. coli.E. coli ûndergiet fermentaasje mei hege tichtheid, dan fêst-flüssige skieding, en kolleksje fan E. coli.De E. coli wurdt dan ûnderwurpen oan alkaline lysis, centrifugal bêst-floeistof skieding en mikrofiltration opheldering nei lysis, ultrafiltration en konsintraasje nei opheldering, en dan chromatography suvering.
Reiniging fan plasmid DNA:
Foregene Algemiene Plasmid Mini Kit
【1】苗鹤凡, 郭勇, 江新香.mRNA疫苗研究进展及挑战[J].免疫学杂志, 2016(05):446-449.
【2】Pardi N, Hogan MJ, Porter FW, et al.mRNA faksinen - in nij tiidrek yn faksinology[J].Natuerresinsjes Drug Discovery, 2018.
【3】Kramps T., Elbers K. (2017) Introduction to RNA Vaccines.Yn: Kramps T., Elbers K. (eds) RNA Vaccines.Metoaden yn molekulêre biology, vol 1499. Humana Press, New York, NY.
【4】Maruggi G, Zhang C, Li J, et al.mRNA as in transformative technology foar faksinûntwikkeling om ynfeksjesykten te kontrolearjen [J].Molekulêre terapy, 2019.
【5】Sergio Linares-Fernández, Céline Lacroix.
Post tiid: Aug-05-2021
