RNase is in gefoelich wurd dat in protte studinten dy't faak RNA-ekstraksje-eksperiminten dogge net wolle hearre.Folslein bewapene, it RNA dat úteinlik waard ekstrahearre mei de tige giftige reagents fenol en chloroform waard degradearre.Ik bin net fermoedsoenje!!!Hjoed, lit ús ris efkes yn 'e oarsprong fan' e ferneamde Rnase.

Ribonuklease (RNase), of RNase, is in nuklease dy't RNA kin hydrolysearje yn lytse molekulen.RNase, as in lyts molekuleprotein, is ûngewoan stabyl .Konvinsjonele hege temperatuer en hege druk stoomsterilisaasje en proteïne-ynhibitoren kinne it net folslein ynaktivearje.De stabiliteit fan RNase komt benammen fan 'e disulfidebindingen yn' e struktuer.Bygelyks, de meast brûkte RNase fan bovine pancreas hat mar 124 aminosoeren, mar befettet 4 disulfide obligaasjes.Sulphurbân en disulfidebân jouwe RNase poerbêste thermyske stabiliteit.Derneist hat rnase in relatyf lyts molekulêr gewicht en kin it yn in protte gefallen syn oarspronklike konformaasje fluch werstelle.

Neist ekstreem stabyl te wêzen,RNases binne oeral yn it laboratoarium .RNase is in biologysk ferdigeningsmeganisme.Foar in sel is exogenous RNA faak fataal.Yn ferliking mei eksogene DNA is exogenous RNA faak gefaarliker.RNA wurdt lokkich transkribearre en oerset, dus hast alle organismen hawwe RNases ûntwikkele om te ferdigenjen tsjin de ynvaazje fan exogenous RNA.Dêrom, de baktearjele sellen kultivearre yn it laboratoarium en jo dy't extract RNA útstrielje it aroma fan RNase.Minske lichemsfloeistoffen (speeksel, triennen, ensfh.) Befette in grutte hoemannichte RNase, dus net skrieme as RNA ôfbrutsen is.Hoe mear jo gûle, hoe slimmer de RNA-degradaasje!!Suster Daiyu is net geskikt foar RNA-ekstraksje!

Dêrnjonken befettet jo teare hûd ek in protte RNase, en de markers, pipetten, kuolkastdoarren en doarhandgrepen dy't troch de hûd oanrekke binne, befetsje ek RNase.

Mei safolle rambling, litte wy ris sjen hoe't jo moatte omgean mei RNases.

It earste ding dat elkenien tinkt by it fuortheljen fan RNA isDEPC(diethyl pyrocarbonate).DEPC denatureart benammen it aaiwyt troch te kombinearjen mei de imidazolring fan 'e RNase aktive groep histidine, wêrtroch de aktiviteit fan it enzyme ynhibearret.0,1% DEPC kin hawwe in bettere removal effekt op RNase, mar wy moatte betelje omtinken dat DEPC is in bekend carcinogen, dus spesjaal omtinken moatte wurde betelle by it brûken fan it.

Foar RNase moatte wy begjinne fan twa aspekten,de earste is om de aktiviteit fan endogene RNase te remmen

Konvinsjonele RNA-ekstraksje-reagenzjes lykas guanidine-isothiocyanate en DTT yn Trizol kinne de disulfidebân fan RNase iepenje, mar d'r binne noch wat RNases, benammen yn weefselmonsters, dus omtinken foar lege temperatuer.

1.Dompelje it weefselmonster daliks yn floeibere stikstof nei it útnimmen, of yn in kommersjele oplossing foar RNA-behâld.

2.Nei it ekstrahearjen fan it RNA fan 'e selmonster, foegje it ta oan' e lysis-oplossing en lysearje it op 'e iiskast

3. It is it bêste om floeibere stikstof te brûken foar it slypjen doe't weefsel samples wurde homogenized.By it brûken fan in elektryske homogenisator sûnder floeibere stikstof, betelje omtinken oan it folslein pre-koelen fan de homogenate adapter.

De twadde is exogenous DNase

1.Wês folslein bewapene, draach in laboratoariumjas, draach in masker, en wês wis dat jo in pear nije wanten (wês net sa thrifty!! It moat opmurken wurde dat Trizol is super corrosive, en it is ek hiel sterk troch wanten, dus net drip op dyn hannen).

2.Alle brûkte pipet tips, EP buizen, PCR buizen en oare apparatuer moatte wurde de-RNase behannele.It kin wurde weagje yn 0,1% DEPC en dan drukke ûnder hege druk.Soarch omtinken foar de operaasje yn in dampkap.Lokale tyrannen kinne direkt verbruiksartikelen keapje foar it fuortheljen fan enzymen.

PS: Lit my jo in luie metoade fertelle.Hoewol't hege temperatuer en hege druk kin net hielendal fuortsmite RNase, it sil fuortsmite in grut part fan it.2 kear fan hege temperatuer en hege druk hat in goed effekt, en de winning fan RNA hat net folle effekt.

3.Alkohol kin proteïnen denaturearje,sadat de RNA-ekstraksjetafel kin wipe wurde mei 75% alkohol , en wanten kinne ek wurde spuite mei alkohol.

4.De definitive RNA-oplossende oplossing en sintrifugebuis moatte ek de-RNase behannele wurde.DEPC wetter is in faak brûkte RNA-oplossende oplossing.Litte wy prate oer de juste tariedingmetoade fan DEPC-wetter (ûnthâld om de kommersjele DEPC opnij te ferpakken as jo it keapje)

Foegje DEPC ta oan ultrapure wetter by 1:1000, skodzje goed, lit oernachtsje op 37 ° C, en sterilisearje op 121 ° C ûnder hege temperatuer en hege druk foar 15 minuten.DEPC wetter kin wurde opslein by -20 ° C yn 1ml aliquots.

As lêste, om te summen: lege temperatuer is de kaai, verbruiksartikelen wurde goed behannele, folslein bewapene en minder praat!

No, dat is it foar de strategy fan hjoed.Ik winskje jo alle RNA-konsintraasje en suverens dy't jo neamd hawwe.Beide A260/A280 binne 2.0!!!

Fansels, as jo brûke inkeamertemperatuer operaasje RNA ekstraksje kit, Jo meie net tsjinkomme boppesteande problemen.

Operaasje by keamertemperatuer, sûnder it tafoegjen fan DNase, ekstrakt totaal RNA út sellen yn 11 minuten, en ekstrakt totaal RNA út dierlike weefsels of planten yn 30 minuten.

Foar proefmonsters, nim dan kontakt op mei:overseas@foregene.com

Relatearre produkten:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/