De lege ferhâlding fan A260 / A230 wurdt meastal feroarsake troch ûnreinheden mei de maksimale absorption golflingte by 230nm.Litte wy sjen wat dizze ûnreinheden befetsje:

• Common pollutants	Absorpsje golflingte	Ratio effekt
  Protein	~230nm en 280nm	Simultane reduksje fan A260/A 280en A260/A 280ferhâldingen
  Guanidine sâlt	220-240 nm	Reduzje de A260/A 280ferhâlding
  Fenol	~270 nm	-
  Trizol	~230nm en 270nm	Reduzje de A260/A 280ferhâlding
  EDTA	~230 nm	Reduzje de A260/A 280ferhâlding
  Etanol	230-240 nm	Reduzje de A260/A 280ferhâlding

 
 
 
Absorpsjegolflingte en kontrastwearde fan mienskiplike pollutants

Protein fersmoarging
Proteinfersmoarging kin wurde beskôge as de meast foarkommende fersmoarging yn it proses fan nukleïnesûrwinning.Protein bestiet tusken de boppeste wetterige faze en de legereorganyskfaze.Fersmoarging sil ferminderje de ferhâlding fan A260 / A280 en A260 / A230 tagelyk, en de ferhâlding fan A260 / A230 sil feroarje mear fansels as de ferhâlding fan A260 / A280.
Tidens folgjendeomkearde transkripsjeor qPCR reaksjes, proteïneresten kinne enzymfunksje remme of bemuoie.De bêste manier om proteïnefersmoarging te foarkommen is it prinsipe fan "leaver minder dan mear, in protte kearen in lyts bedrach" yn gedachten te hâlden by it aspirearjen fan de supernatant.

2. Guanidinium fersmoarging
hydrochloride (GuHCl) en guanidine thiocyanate (GTC) hawwe it effekt fan denaturearjende proteïnen, dy't selmembranen fluch kinne ferneatigje tidens it nukleïnesûr-ekstraksjeproses, wêrtroch proteïndenaturaasje en delslach feroarsaakje.De absorptionsgolflingte fan GuHCl en GTC is tusken 220-240 nm, en deoerbliuwende guanidinium sâlt sil ferminderje de ferhâlding fan A260 / A230.Hoewol it oerbliuwende guanidinium sâlt de ferhâlding sil ferminderje,de ynfloed op streamôfwerts eksperiminten is eins negligible.

3. Trizol fersmoarging
De wichtichste komponint fan Trizol is fenol.De wichtichste funksje fan fenol is om sellen te lysearjen en aaiwiten en nukleïnesûrstoffen yn sellen frij te meitsjen.Hoewol fenol aaiwiten effektyf kin denaturearje, kin it RNase-aktiviteit net folslein ynhiberje.Dêrom wurde 8-hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β-mercaptoethanol, ensfh.
By it ekstrahearjen fan sellulêr RNA kin Trizol de sellen rap lysearje en de nuklease dy't út 'e sellen frijlitten ynhibearje, en de oerbliuwende Trizol sil de ferhâlding fan A260/A230 signifikant ferminderje.
Ferwurkingsmetoade: By sintrifuging moat it opmurken wurde dat it fenol yn Trizol maklik oplosber is yn 'e wetterfaze ûnder de betingst fan 4 ° en keamertemperatuer.

4. Ethanol residu
Ethanol wurdt brûkt yn it lêste proses om it DNA te precipitearjen by it oplossen fan sâltionen dy't bûn wurde kinne oan it DNA.De absorption golflingte fan de heechsteabsorption pyk fanethanol is ek op 230-240 nm, dy'tsil ek ferminderje de ferhâlding fan A260 / A230.
De metoade foar it foarkommen fan ethanolresidu kin twa kear wurde werhelle tidens de definitive eluaasje, blaast yn 'edampkapfoar twa minuten om de ethanol folslein te ferdampen foardat jo buffer tafoegje foar eluaasje.
It moat lykwols bekend wêze dat de ferhâlding allinich in evaluaasje-yndeks is fan RNA-kwaliteit.As de hjirboppe neamde operaasjes strikt regele binne, sil de ôfwiking tusken de ferhâlding en it standertberik gjin grutte ynfloed hawwe op streamôfwerts eksperiminten.
Relatearre produkten:
Animal Total RNA Isolaasje kit
Plant Total RNA Isolaasje kit
Sel Totaal RNA Isolaasje kit
Plant Total RNA Isolation kit Plus