Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit foar plant ryk oan polysaccharides en polyfenolen
Kit beskriuwing:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Foar suvering fan totale RNA út algemiene plant samples befetsje hege polysaccharide en polyphenol komponinten.
Ekstrahearje fluch totaal RNA fan hege kwaliteit út plantmonsters mei hege ynhâld fan polysacchariden en polyfenolen.
RNase-frij mei DNA-reinigingskolom
Ienfâldich - alle operaasjes wurde foltôge by keamertemperatuer
Snel-operaasje kin yn 30 minuten foltôge wurde
Feilich - gjin organysk reagens brûkt 
Spesifikaasjes
50 Preps, 200 Preps
De kit brûkt de spinkolom en formule ûntwikkele troch Foregene, dy't effisjint hege suverens en heechweardich totale RNA út ferskate plantweefsels mei hege ynhâld fan polysaccharides of polyfenolen kinne ekstrahearje.It leveret de DNA-reinigingskolom dy't genomysk DNA maklik kin ferwiderje fan 'e supernatant en weefsellysate.RNA-allinich kolom kin RNA effektyf bine.De kit kin in grut oantal samples tagelyk ferwurkje.
It hiele systeem befettet gjin RNase, sadat it suvere RNA net degradearre wurdt.Buffer PRW1 en Buffer PRW2 kinne derfoar soargje dat it krigen RNA net kontaminearre is troch proteïne, DNA, ioanen en organyske ferbiningen.
Kit komponinten
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Buffer PRW1, Buffer PRW2 |
| RNase-frije ddH2O, DNA-reinigingskolom |
| RNA-Allinnich Kolom |
Funksjes & foardielen
■ Operaasje by keamertemperatuer (15-25 ℃) troch it hiele proses, sûnder iisbad en sintrifugering by lege temperatuer.
■ Folsleine kit RNase-Free, gjin soargen oer RNA-degradaasje.
■ Benammen geskikt foar de suvering fan RNA út plantmonsters fan polysaccharides en polyphenols.
■ DNA-Cleaning Column bynt spesifyk oan DNA, sadat de kit kin fuortsmite genomic DNA fersmoarging sûnder taheakjen DNase.
■ Hege RNA-opbringst: RNA-allinich Kolom en unike formule kinne RNA effisjint suverje.
■ Snelle snelheid: maklik te betsjinjen en kin binnen 30 minuten foltôge wurde.
■ Feiligens: gjin organysk reagens is nedich.
■ Hege kwaliteit: De suvere RNA-fragminten binne fan hege suverens, frij fan proteïne en oare ûnreinheden, en kinne foldwaan oan ferskate downstream eksperimintele tapassingen.
Produkt parameters
■ Downstream applikaasjes: earste-string cDNA synteze, RT-PCR, molekulêre cloning, Northern Blot, etc.
■ Sample: Farske of beferzen plant weefsels fan polysaccharides en polyphenols
■ Dosearring: 50mg plant weefsel
■ Maksimum RNA binding kapasiteit fan suvering kolom: 80 μg
■ Eluaasje folume: 50-200 μl
Kit applikaasje
It is geskikt foar de winning en suvering fan totale RNA út farske of beferzen plant weefsel samples (benammen farske plant leaf weefsel) mei hege polysaccharide en polyphenol ynhâld.
Wurk flow
Diagram
Plant Total RNA Isolation Kit Plus ferwurke 50mg farske blêden fan polysaccharides en polyphenols, en 5% suvere RNA waard hifke troch elektroforese.
1: banaan
2: gyk
3: wol
4: granaatappel
Opslach en Shelf libben
Dit kit kin wurde opslein foar 24 moannen ûnder droege omstannichheden by keamertemperatuer (15-25 ℃);as it langer opslein wurde moat, kin it wurde opslein yn 2-8 ℃.
Buffer PSL1 kin pleatst wurde op 4 ℃ foar 1 moanne nei it tafoegjen fan β-mercaptoethanol (it wurdt oanrikkemandearre om it tagelyk fan eksperimint ta te foegjen).
De kolom ferstoppe
Nei't de kolom ynsletten is, wurdt de RNA-opbringst fermindere of sels ûnmooglik om it RNA te suverjen, en de krigen RNA-massa is leech.
Algemiene oarsaak analyze:
1. Sample breaks binne net yngeand.
Sample breakage feroarsaket net hielendal DNA-CLEANING COLUMN wurde blokkearre, wylst beynfloedet RNA opbringst en kwaliteit.Wy riede flugge grinding operaasje yn in foldwaande floeibere stikstof as jo bruts de monsters, Besykje te crush de stekproef sel muorre, sel membraan en oare weefsel.Foar plantmonsters fan polyolpolysaccharides riede wy oan dat jo Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS brûke.
2. Wannear't suction de skieden monster supernatant mei DNA-Cleaning Column, kin de mooglike sel fersnippere delslach ynhalearre.
De selfersnippere sediminten dy't nommen wurde sille de RNA-ONLY-kolom feroarsaakje dy't sil wurde blokkearre as de RNA-adsorpsjeoperaasje wurdt útfierd (sjoch stap 6).Wy riede jo oan as jo dizze supernatant foarsichtich sûgje om foar te kommen dat selpún wurdt sûge.
3. Sample initial bedrach is tefolle.
Oermjittich gebrûk fan stekproef sil resultearje yn ûnfolsleine stekproeffragmintaasje of ûnfolsleine sellysis troch Buffer PSL1, wat resulteart yn blokkearje fan 'e suveringskolom by suvering.Plant Total RNA Isolation Kit Elke ienige suvere operearjende sample is 50 mg.Foar plantmonsters fan polyolpolysacchariden riede wy oan dat jo Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS besykje.
4. De temperatuer fan 'e sintrifuge is te leech.
It heule RNA-isolaasje- en suveringsproses wurdt útfierd by keamertemperatuer (20-25°C), útsein dat de stekproef weefsel wurdt brutsen troch floeibere stikstof. De temperatuer fan guon kryogenic centrifuges is leger as 20℃, dy't kin feroarsaakje blokkade fan DNA-Cleaning Column en / of RNA-Only Column.As dit bart, set de sintrifugetemperatuer op 20-25℃, ensoargje derfoar dat it lysisgemik en/of de ethanol-tafoege supernatant waard foarferwaarme oant 37°C.
Gjin RNA ekstrahearre of RNA-opbringst is leech
D'r binne meastentiids in protte faktoaren dy't de effisjinsje fan herstel beynfloedzje, lykas: sample RNA-ynhâld, operaasjemetoade, it elueringsvolumint, ensfh.
Analyse fan mienskiplike oarsaken as hjirûnder:
1.In iis bad of lege temperatuer (4 ° C) centrifugation waard útfierd tidens de operaasje.
Suggestje: Operearje by keamertemperatuer (15-25°C) yn it hiele proses, net dwaan iis bad en lege temperatuer centrifugation.
2.De RNA is degradearre troch ferkearde behâld fan 'e stekproef of lange termyn behâld fan' e stekproef.
Oanrikkemedaasje: Freshly sammele samples moatte fluch beferzen wurde yn floeibere stikstof, en dan opslein by -80 ° C foar in lange tiid, foarkomme werhelle freezing en thawing fan gebrûk;of fuortdaliks soak de monsters yn RNA stabilisator RNAlater oplossing (dieremonsters).
3.Insufficient sample fragmintaasje en lysis liede ta blokkearjen fan 'e suveringskolom.
Suggestje: By it slypjen fan it weefsel, soargje asjebleaft dat it weefsel genôch gemalen is, en oerdrage it fluch nei de foarôf tare Buffer PSL1 (befêstigje dat it juste oanpart fan β-ME is tafoege, sjoch stap 1 fan 'e proseduere).
4.De eluent is ferkeard tafoege.
Suggestje: Soargje derfoar dat RNase-Free ddH2O wurdt drippe yn 'e midden fan' e suvering kolom membraan.
5.De krekte folume fan absolute ethanol waard net tafoege oan Buffer PSL2 of Buffer PRW2.
Suggestje: Folgje asjebleaft de ynstruksjes, foegje it juste folume fan absolute ethanol ta oan Buffer PSL2 en Buffer PRW2 en mingje goed foardat de kit wurdt brûkt.
6.It bedrach fan weefselmonster is net geskikt.
Suggestje: Brûk 50 mg weefsel per 500 μl buffer PSL1.It brûken fan tefolle weefsel sil de hoemannichte ekstraktearre RNA ferminderje en de suverens fan 'e resultearjende RNA sil ek wurde fermindere.Wy riede sterk oan dat de earste sample dosage net mear as 50 mg per RNA ekstraksje operaasje.
7.Inappropriate elueringsvolume of ûnfolsleine eluaasje.
Suggestje: It eluentvolumint fan 'e suveringskolom is 50-200 μl;as it elueringseffekt net befredigjend is, is it oan te rieden om de tiid by keamertemperatuer te ferlingjen nei it tafoegjen fan preheated RNase-Free ddH2O, lykas 5-10min.
8.De suveringskolom hat ethanol-residu nei it waskjen mei BufferPRW2.
Suggestje: As de lege buis foar 1 min sintrifuge is en d'r noch ethanol oerbliuwt nei it wassen yn Buffer PRW2, kinne jo de tiid fan 'e lege buis-sintrifugaasje ferheegje nei 2 min, of pleats de suveringskolom by keamertemperatuer foar 5 min om de oerbliuwende ethanol folslein te ferwiderjen.
9.De kit waard ferkeard brûkt.
Suggestje: Foar plantmonsters fan polyfenolyske polysaccharides, mei gebrûk fan gewoane kits lykas Plant Total RNA Isolation Kit kinne miskien net ideale RNA-monsters krije.Wy riede jo oan om Plant Total RNA IsolationKit Plus te brûken, dat spesjaal is ûntworpen foar polyphenolyske polysaccharide-plantmonsters.In kit spesjaal ûntwikkele foar it ekstrahearjen fan RNA út polyfenol- en polysaccharide-plantmonsters.
OD260/OD280 wearde is leech
RNA-eluaasje mei ddH2O en brûkt foar spektrofotometerlêzingen resultearret yn lege OD260 / OD280-wearden.Wy advisearje it brûken fan 10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (ynstee fan RNase-frije ddH2O om RNA te elueren) om relatyf korrekte OD260 / OD280-wearden te krijen, sjoch "RNA-konsintraasje- en suveringsassays" op side 19.
It suvere RNA wurdt degradearre
De kwaliteit fan suvere RNA is relatearre oan faktoaren lykas monsterbehâld, RNase-fersmoarging en manipulaasje.
Analyse fan mienskiplike oarsaken:
1.Tissue samples waarden net opslein yn 'e tiid nei kolleksje.
Oanrikkemedaasje: As de weefselmonsters net op 'e tiid nei it sammeljen wurde brûkt, bewarje se asjebleaft yn floeibere stikstof by lege temperatuer fuortendaliks of oerdrage se nei -80 ° C foar opslach op lange termyn nei fluch befriezen yn floeibere stikstof, of dompelje de samples fuortendaliks yn RNA-stabilisator RNAlater oplossing (diermonsters ).Foar RNA-ekstraksje, besykje nij sammele weefselmonsters te brûken.
2.Repeated freezing en thawing fan weefsel samples.
Suggestje: By it opslaan fan weefselmonsters is it it bêste om se yn lytse stikjes te snijen foar behâld, en in diel dêrfan út te nimmen by it brûken fan se om de degradaasje fan RNA te foarkommen troch werhelle befriezen en ûntdooijen fan 'e samples.
3.RNase wurdt yntrodusearre yn 'e operaasje keamer of net droegen wegwerphandschoenen, maskers, ensfh.
Suggestje: RNA-ekstraksje-eksperiminten wurde it bêste útfierd yn aparte RNA-operaasjes, en de laboratoariumtafel moat foar it eksperimint skjinmakke wurde, en wegwerphandschoenen en maskers moatte wurde droegen tidens it eksperimint om RNA-degradaasje te foarkommen feroarsake troch de ynfiering fan RNase yn 'e grutste mjitte.
4.De reagens is kontaminearre troch RNase by gebrûk.
Suggestje: Ferfange mei in nije searje fan plant totale RNA-ekstraksjekits foar relatearre eksperiminten.
5.De sintrifuge buizen en pipette tips dy't brûkt wurde foar RNA-manipulaasje binne kontaminearre mei RNase.
Suggestje: Soargje derfoar dat de centrifuge buizen, pipette tips, pipetten, ensfh brûkt yn RNA ekstraksje binne allegear RNase-Free.
Ynstruksje hânboeken:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus Instruction Manual
