Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Direct Cell Lysis Cell Ready One-stap qRT-PCR Kits
Beskriuwings
Dizze kit brûkt in unyk lysisbuffersysteem dat RNA fluch kin frijlitte út kweekte selmonsters foar RT-qPCR-reaksjes, en elimineert dêrmei it tiidslinende en moeisame RNA-suveringsproses.It RNA-sjabloan kin yn mar 7 minuten wurde krigen.De 5×Direkte RT Mix en 2×Direkte qPCR Mix-SYBR-reagents levere troch de kit kinne fluch en effektyf real-time kwantitative PCR-resultaten krije.
5×Direkte RT Mix en 2×Direkte qPCR Mix-SYBR hawwe sterke inhibitor tolerânsje, en de lysate fan de gebrûk kin brûkt wurde as it sjabloan foar RT-qPCR direkt.Dit kit befettet de unike RNA hege affiniteit Foregene reverse transkriptase, en Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, reaksje buffer, PCR optimizer en stabilisator.
Spesifikaasjes
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Kit komponinten
| Diel I | Buffer CL |
| Forgene Protease Plus II | |
| Buffer ST | |
| Diel II | DNA Eraser |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50 × ROX Reference Dye | |
| RNase-frije ddH2O | |
| Ynstruksjes | |
Funksjes & foardielen
■Ienfâldich en effektyf: mei Cell Direct RT-technology kinne RNA-monsters yn mar 7 minuten wurde krigen.
■ De fraach nei stekproef is lyts, sa leech as 10 sellen kinne wurde hifke.
■ Hege trochstreaming: it kin fluch detect RNA yn sellen kweekte yn 384, 96, 24, 12, 6-well platen.
■ DNA Eraser kin fluch fuortsmite frijjûn genomen, sterk ferminderjen de ynfloed op folgjende eksperimintele resultaten.
■ Optimalisearre RT- en qPCR-systeem makket de twa-stap RT-PCR omkearde transkripsje effisjinter en PCR mear spesifyk, en mear resistint foar RT-qPCR-reaksje-ynhibitoren.
Kit applikaasje
Tapassingsgebiet: kweekte sellen.
- RNA útbrocht troch monster lysis: allinnich fan tapassing op de RT-qPCR sjabloan fan dizze kit.
- De kit kin brûkt wurde foar de folgjende doelen: analyse fan gen-ekspresje, ferifikaasje fan siRNA-bemiddeld gen-silencing-effekt, drugsscreening, ensfh.
Diagram
Opslach en Shelf libben
Diel I fan dizze kit moat wurde opslein by 4 ℃;Diel II moat wurde opslein by -20 ℃.
Foregene Protease Plus II moat wurde opslein op 4℃, net befrieze by -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-SYBR moat wurde opslein op -20℃yn it tsjuster;as faak brûkt, kin it ek wurde opslein op 4℃ foar opslach op koarte termyn (brûk binnen 10 dagen).
Real Time PCR primer ûntwerpprinsipes
Foarút Primer en Reverse Primer
Foar Real Time PCR is primerûntwerp heul wichtich.Primers binne relatearre oan de spesifisiteit en effisjinsje fan PCR-amplifikaasje, en kinne wurde ûntwurpen mei ferwizing nei de folgjende prinsipes:
Primer lingte: 18-30bp.
GC ynhâld: 40-60%.
Tm-wearde: Primer-ûntwerpsoftware, lykas Primer 5, kin de Tm-wearde fan 'e primer jaan.De Tm-wearden fan 'e streamop- en streamôfwerts primers moatte sa ticht mooglik wêze.De Tm-berekkeningsformule kin ek brûkt wurde: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).By it útfieren fan PCR wurdt in temperatuer ûnder de primer Tm-wearde fan 5 ° C algemien selektearre as de annealingtemperatuer (de oerienkommende ferheging fan 'e annealingtemperatuer kin de spesifisiteit fan 'e PCR-reaksje ferheegje).
Primers en PCR-produkten:
Untwerp primer PCR amplification produkt lingte is by foarkar 100-150bp.
Untwerpprimers yn it sekundêre strukturele gebiet fan 'e sjabloan moatte safolle mooglik foarkommen wurde.
Foarkom de formaasje fan 2 of mear komplementêre basen tusken de 3'-einen fan streamop- en streamôfwerts primers.
Primer 3′ terminalbasis kin net oanwêzich wêze mei 3 ekstra opfolgjende G of C.
De primers sels kinne gjin komplementêre struktueren hawwe, oars sil in haarspjeldstruktuer wurde foarme, dy't ynfloed hat op PCR-amplifikaasje.
ATCG moat sa lyklik mooglik ferdield wurde yn 'e primersekwinsje, en de 3'-terminalbasis moat wurde foarkommen as T.
Taheakke 1: Cell Direct RT-qPCR Kit komponint supplement pack
1.Cell Lysis Solution
|
| |||
| Kit komponinten (24-well lysis systeem / put) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Dielik | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Forgene Protease Plus II | 400 μl | 1ml × 2 | |
| Buffer ST | 1ml × 2 | 10 ml | |
| DielII | DNA Eraser | 400 μl | 1ml × 2 |
2.RT Mix
|
| |
| Kit komponinten (20 μl reaksjesysteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-frije ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Kit komponinten (20 μl reaksjesysteem) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50 × ROX Reference Dye | 40 ul | 200 μl |
| RNase-frije ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Ynstruksje hânboeken:
