(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – SYBR Green I
Beskriuwings
De(96-well) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit-SYBR Green Ijoutin unyk lysisbuffersysteemto fluch frijlitte RNAút kweekte selsamples foar RT-qPCR-reaksjes, it eliminearjen fan de tiidslinend en omslachtigeRNA suvering proses, en duorret mar 7 minuten te krijen de fereaske RNA template.De5× Direct RT Mixen2× Direct qPCR Mix-SYBRfoarsjoen yn 'e doaze kin fluch eneffektyf real-time kwantitative krijePCR resultaten.
5× Direct RT Mix en 2× Direct qPCR Mix-SYBR hawwe sterke inhibitor tolerânsje, en kin gebrûk meitsje fan de lysate fan de stekproef wurde hifke as sjabloan foar effisjinte reverse transkripsje en spesifike amplification.It reagens befettet Foregene unike Reverse Transcriptase mei hege affiniteit foar RNA, lykas Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , reaksje buffer, PCR optimizer en stabilisator, en kin brûkt wurde yn gearhing mei de lysis buffer te ûntdekken de stekproef fluch, maklik en sekuer, en it hat de skaaimerken fan hege gefoelichheid, sterke spesifisiteit en goede stabiliteit.
De kit is rjochte op mikro-systeem lysis fan 96-well culturele sellen, en hat goede uniformiteit en gearhing;de kit komponinten jouwe 96 lysis reaksjes, 96 reverse transkripsje reaksjes en 96 × 2 qPCR reaksjes, dat kin foldwaan oan de 96-well sellen plaat foar ien kear gebrûk, it foarkommen fan de fersmoarging feroarsake troch werhelle iepening, freezing en thawing fan reagents en de ôfbraak fan reagent prestaasjes.
Kit komponinten
| Kit komposysje ( 50 μL lysissysteem/20 μLRT reaksje systeem /20μL qPCR reaksje systeem) | DRT-03011 | Opmerking | |
| 96T | |||
| DielI | BufferCL | 5 ml | SelLysis |
| FoarigeProtease Plus II | 100 μL | ||
| BufferST | 500 μL | ||
| Diel II | DNAEraser | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- FrijddH2 O | 1,7ml |
| |
| Mjierliks | 1 stik | 1 tsjinje | |
*: De lysis reagens DNA Eraser is opnaam yn diel II fan de kit;Cell Lysis, RT, en qPCR komponinten kinne wurde kocht apart.
Funksjes & foardielen
■Ienfâldich en effektyf: mei Cell Direct RT-technology kinne RNA-monsters yn mar 7 minuten wurde krigen.
■ De fraach nei stekproef is lyts, sa leech as 10 sellen kinne wurde hifke.
■ Hege trochstreaming: it kin fluch detect RNA yn sellen kweekte yn 384, 96, 24, 12, 6-well platen.
■ DNA Eraser kin fluch fuortsmite frijjûn genomen, sterk ferminderjen de ynfloed op folgjende eksperimintele resultaten.
■ Optimalisearre RT- en qPCR-systeem makket de twa-stap RT-PCR omkearde transkripsje effisjinter en PCR mear spesifyk, en mear resistint foar RT-qPCR-reaksje-ynhibitoren.
Kit applikaasje
Tapassingsgebiet: kweekte sellen.
- RNA útbrocht troch monster lysis: allinnich fan tapassing op de RT-qPCR sjabloan fan dizze kit.
- De kit kin brûkt wurde foar de folgjende doelen: analyse fan gen-ekspresje, ferifikaasje fan siRNA-bemiddeld gen-silencing-effekt, drugsscreening, ensfh.
Opslach en Shelf libben
Diel I fan dizze kit moat wurde opslein op 4℃;Diel II moat wurde opslein by -20 ℃.
Foregene Protease Plus II moat wurde opslein op 4℃, net befrieze by -20 ℃.
Reagens 2×Direct qPCR Mix-Taqman moat wurde opslein op -20℃yn it tsjuster;as faak brûkt, kin it ek wurde opslein op 4℃ foar opslach op koarte termyn (brûk binnen 10 dagen).
Real Time PCR primer ûntwerpprinsipes
Foarút Primer en Reverse Primer
Foar Real Time PCR is primerûntwerp heul wichtich.Primers binne relatearre oan de spesifisiteit en effisjinsje fan PCR-amplifikaasje, en kinne wurde ûntwurpen mei ferwizing nei de folgjende prinsipes:
- Primer lingte: 18-30bp.
- GC ynhâld: 40-60%.
- Tm-wearde: Primer-ûntwerpsoftware, lykas Primer 5, kin de Tm-wearde fan 'e primer jaan.De Tm-wearden fan 'e streamop- en streamôfwerts primers moatte sa ticht mooglik wêze.De Tm-berekkeningsformule kin ek brûkt wurde: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).By it útfieren fan PCR wurdt in temperatuer ûnder de primer Tm-wearde fan 5 ° C algemien selektearre as de annealingtemperatuer (de oerienkommende ferheging fan 'e annealingtemperatuer kin de spesifisiteit fan 'e PCR-reaksje ferheegje).
- Primers en PCR-produkten:
- Untwerp primer PCR amplification produkt lingte is by foarkar 100-150bp.
- Untwerpprimers yn it sekundêre strukturele gebiet fan 'e sjabloan moatte safolle mooglik foarkommen wurde.
- Foarkom de formaasje fan 2 of mear komplementêre basen tusken de 3'-einen fan streamop- en streamôfwerts primers.
- Primer 3′ terminalbasis kin net oanwêzich wêze mei 3 ekstra opfolgjende G of C.
- De primers sels kinne gjin komplementêre struktueren hawwe, oars sil in haarspjeldstruktuer wurde foarme, dy't ynfloed hat op PCR-amplifikaasje.
- ATCG moat sa lyklik mooglik ferdield wurde yn 'e primersekwinsje, en de 3'-terminalbasis moat wurde foarkommen as T.
Taheakke1: cell direktRT-qPCR Kit komponintt oanfolling pakket
1.Cell Lysis Solution
| Cell Lysis Solution | |||
| Kit komponinten (24-well lysis systeem / put) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Dielik | Buffer CL | 20 ml | 100 ml |
| Forgene Protease Plus II | 400 μl | 1ml × 2 | |
| Buffer ST | 1ml × 2 | 10 ml | |
| DielII | DNA Eraser | 400 μl | 1ml × 2 |
| RT Mix | |
| Kit komponinten (20 μl reaksjesysteem) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNase-frije ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR Mix | ||
| Kit komponinten (20 μl reaksjesysteem) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × ROX Reference Dye | 40 ul | 200 μl |
| RNase-frije ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Ynstruksje hânboeken:
