Gjin amplification sinjalen

1.De Taq DNA Polymerase yn 'e kit ferliest syn aktiviteit troch ferkearde opslach of ferrin fan' e kit.
Oanbefelling: Befêstigje de opslachbetingsten fan 'e kit;foegje opnij in passend bedrach fan Taq DNA Polymerase ta oan it PCR-systeem of keapje in nije Real Time PCR Kit foar relatearre eksperiminten.

2.Der binne in protte ynhibitoren fan Taq DNA Polymerase yn 'e DNA-sjabloan.
Suggestje: Reinigje it sjabloan opnij of ferminderje it oantal brûkte sjabloan.

3.De Mg2+ konsintraasje is net geskikt.
Oanbefelling: De Mg2+ konsintraasje fan 'e 2 × Real PCR Mix dy't wy leverje is 3.5mM.Foar guon spesjale primers en sjabloanen kin de Mg2+ konsintraasje lykwols heger wêze.Dêrom kinne jo MgCl2 direkt tafoegje om de Mg2+ konsintraasje te optimalisearjen.It is oan te rieden om elke kear de Mg2+ 0.5mM te ferheegjen foar optimisaasje.

4.De PCR-amplifikaasjebetingsten binne net gaadlik, en de primersekwinsje of konsintraasje is ferkeard.
Suggestje: befêstigje de krektens fan 'e primersekwinsje en de primer is net degradearre;as it amplification sinjaal is net goed, besykje te ferleegjen de annealing temperatuer en oanpasse de primer konsintraasje passend.

5.It bedrach fan sjabloan is te min of te folle.
Oanrikkemedaasje: Utfiere sjabloan linearization gradient dilution, en selektearje de sjabloan konsintraasje mei de bêste PCR effekt foar Real Time PCR eksperimint.

NTC hat te hege fluorescence wearde

1.Reagent fersmoarging feroarsake tidens operaasje.
Oanbefelling: Ferfange mei nije reagents foar Real Time PCR-eksperiminten.

2.Contamination barde by de tarieding fan it PCR-reaksjesysteem.
Oanrikkemedaasje: Nim de nedige beskermjende maatregels by operaasje, lykas: it dragen fan latekshandschoenen, it brûken fan in pipetpunt mei in filter, ensfh.

3.De primers wurde degradearre, en de degradaasje fan 'e primers sil net-spesifike amplifikaasje feroarsaakje.
Suggestje: Brûk SDS-PAGE elektroforese om te detektearjen oft de primers binne degradearre, en ferfange se mei nije primers foar Real Time PCR-eksperiminten.

Primer dimer of net-spesifike amplification

1.De Mg2+ konsintraasje is net geskikt.
Oanbefelling: De Mg2+ konsintraasje fan 'e 2 × Real PCR EasyTM Mix dy't wy leverje is 3,5 mM.Foar guon spesjale primers en sjabloanen kin de Mg2+ konsintraasje lykwols heger wêze.Dêrom kinne jo MgCl2 direkt tafoegje om de Mg2+ konsintraasje te optimalisearjen.It is oan te rieden om elke kear de Mg2+ 0.5mM te ferheegjen foar optimisaasje.

2.De PCR annealing temperatuer is te leech.
Suggestje: Ferheegje de PCR annealing temperatuer elke kear mei 1 ℃ of 2 ℃.

3.It PCR-produkt is te lang.
Oanbefelling: De lingte fan it Real Time PCR-produkt moat tusken 100-150bp wêze, net mear as 500bp.

4.De primers wurde degradearre, en de degradaasje fan 'e primers sil liede ta it ferskinen fan spesifike amplifikaasje.
Suggestje: Brûk SDS-PAGE elektroforese om te detektearjen oft de primers binne degradearre, en ferfange se mei nije primers foar Real Time PCR-eksperiminten.

5.It PCR-systeem is ferkeard, of it systeem is te lyts.
Suggestje: It PCR-reaksjesysteem is te lyts, sil feroarsaakje dat de deteksjenauwkeurigens fermindert.It is it bêste om it reaksjesysteem te brûken oanrikkemandearre troch it kwantitative PCR-ynstrumint om it Real Time PCR-eksperimint opnij út te fieren.

Slechte werhelling fan kwantitative wearden

1.It ynstrumint is malfunctioning.
Suggestje: D'r kinne flaters wêze tusken elk PCR-gat fan it ynstrumint, wat resulteart yn minne reprodusearberens by temperatuerbehear of deteksje.Kontrolearje asjebleaft neffens de ynstruksjes fan it byhearrende ynstrumint.

2.De sample suverens is net goed.
Oanrikkemedaasje: Unreine samples sille liede ta minne reprodusearberens fan it eksperimint, wêrby't de suverens fan 'e sjabloan en primers omfettet.It is it bêste om it sjabloan opnij te reinigjen, en de primers wurde bêste suvere troch SDS-PAGE.

3.The PCR systeem tarieding en opslach tiid is te lang.
Suggestje: Brûk it Real Time PCR-systeem foar PCR-eksperimint direkt nei tarieding, en lit it net te lang oan 'e kant.

4.De PCR-amplifikaasjebetingsten binne net gaadlik, en de primersekwinsje of konsintraasje is ferkeard.
Suggestje: befêstigje de krektens fan 'e primersekwinsje en de primer is net degradearre;as it amplification sinjaal is net goed, besykje te ferleegjen de annealing temperatuer en oanpasse de primer konsintraasje passend.

5.It PCR-systeem is ferkeard, of it systeem is te lyts.
Suggestje: It PCR-reaksjesysteem is te lyts, sil feroarsaakje dat de deteksjenauwkeurigens fermindert.It is it bêste om it reaksjesysteem te brûken oanrikkemandearre troch it kwantitative PCR-ynstrumint om it Real Time PCR-eksperimint opnij út te fieren.