Buccal Swab / FTA Card DNA Isolation Kit Genomyske DNA-ekstraksje of Purifiaction Kit fan Buccale Swabs
Kit beskriuwing:
Suverje rap genomysk DNA fan hege kwaliteit út buccale swab / FTA-kaartmonsters.
◮Gjin RNase-kontaminaasje:De DNA-Allinnich-kolom levere troch de kit makket it mooglik om it RNA út it genomyske DNA te ferwiderjen sûnder RNase ta te foegjen tidens it eksperimint, wêrtroch it laboratoarium foarkomt dat it kontaminearre wurdt troch exogenous RNase.
◮Snelle snelheid:Foregene Protease hat hegere aktiviteit as ferlykbere proteases, en digests weefselmonsters fluch;de operaasje is ienfâldich, en de genomyske DNA-ekstraksje-operaasje kin binnen 20-80 minuten foltôge wurde.
◮Handich:De centrifugation wurdt útfierd by keamertemperatuer, en der is gjin ferlet fan 4 ° C lege-temperatuer centrifugation of ethanol delslach fan DNA.
◮Feilichheid:Gjin ekstraksje fan organyske reagens is nedich.
◮Hege kwaliteit:It ekstrahearre genomyske DNA hat grutte fragminten, gjin RNA, gjin RNase, en ekstreem lege ionynhâld, dat kin foldwaan oan de easken fan ferskate eksperiminten.
◮Mikro-eluaasjesysteem:It kin de konsintraasje fan genomysk DNA ferheegje, wat handich is foar downstream deteksje as eksperimint.
Beskriuwing
Dizze kit biedt in effisjinte en rappe metoade om hege konsintraasje genomysk DNA te krijen fan buccale swabs en FTA-kaart (bloedflekken).Us bedriuw brûke's unike DNA-allinne silica membraan spin kolom en formule, kombinearre mei Foregene Protease, hege konsintraasje, hege kwaliteit genomic DNA kin wurde wûn yn 80 minuten.De spesjaal ûntworpen lytse suveringskolom bynt genomysk DNA, en it DNA kin eluearre wurde mei in lyts bedrach (15μl) elueringssysteem om de konsintraasje fan it krigen genomyske DNA te ferheegjen, wat handich is foar streamôfwerts deteksje as eksperimint.De kit kin ien of mear samples tagelyk ferwurkje, en it suveringsproses fereasket gjin ekstraksje fan organyske stoffen lykas fenol, chloroform, en tiidslinend isopropanol of ethanol-ôfslach, en de operaasje is ienfâldich en tiidbesparend.
Spesifikaasjes
50 Prep
Kit komponinten
| Buffer ST1 |
| Buffer ST2 |
| Lineêre acrylamide |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Buffer EB |
| Foarige Protease |
| DNA-Allinnich Kolom |
| Ynstruksjes |
Funksjes & foardielen
-Gjin RNase-fersmoarging: De DNA-Allinnich-kolom levere troch de kit makket it mooglik om RNA te ferwiderjen fan genomysk DNA sûnder RNase ta te foegjen tidens it eksperimint, om te foarkommen dat it laboratoarium kontaminearre wurdt troch exogenous RNase.
-Snelle snelheid: Foregene Protease hat hegere aktiviteit dan ferlykbere proteasen, fertarret samples fluch;ienfâldige operaasje.
- Handich: De sintrifugering wurdt útfierd by keamertemperatuer, en der is gjin ferlet fan 4 ° C lege-temperatuer centrifugation of ethanol delslach fan DNA.
-Feiligens: Gjin ekstraksje fan organyske reagens is nedich.
-Hege kwaliteit: It ekstrahearre genomyske DNA hat grutte fragminten, gjin RNA, gjin RNase, en ekstreem lege ionynhâld, dat kin foldwaan oan de easken fan ferskate eksperiminten.
-Mikro-eluaasjesysteem: It kin de konsintraasje fan genomysk DNA ferheegje, wat handich is foar streamôfwerts opspoaren as eksperimint.
Kit applikaasje
It is geskikt foar suvering fan genomysk DNA út de folgjende samples: buccale swabs, FTA Card (bloedvlekken).
Opslach en Shelf libben
-Dit kit kin wurde opslein foar 12 moannen ûnder droege omstannichheden by keamertemperatuer (15-25 ° C);as it langer opslein wurde moat, kin it op 2-8°C opslein wurde.
Opmerking: As opslein by lege temperatuer, is de oplossing gefoelich foar delslach.Foardat gebrûk, wês wis dat jo de oplossing foar in perioade fan tiid yn 'e kit by keamertemperatuer pleatse.As it nedich is, ferwaarmje it yn in 37 ° C wetterbad foar 10 minuten om it delslach op te lossen, en mingje it foar gebrûk.
-Foregene Protease oplossing hat in unike formule, dy't aktyf is as opslein by keamertemperatuer foar in lange tiid (3 moannen);syn aktiviteit en stabiliteit sil better wêze as opslein by 4 ° C, dus it is oan te rieden om it op 4 ° C te bewarjen, tink om it net te hâlden op -20 ° C.
De suveringskolom is ferstoppe
Yn dizze kit, yn 'e genomyske DNA-ekstraksje-operaasje, wurdt de suveringskolom direkt geadsorbeerd op it enzymatyske lysis-gemik fan' e sample sûnder sintrifugaasjestap, en de suveringskolom kin wurde blokkearre fanwegen ûnfolsleine enzymisaasje en hege viskositeit fan 'e stekproef.
De folgjende mooglike oarsaken binne as folget:
1. Unfolsleine enzymatyske fersmoarging fan weefselmonsters.
Oanbefelling: De sample-ferwurkingstiid fan Foregene Protease kin passend útwreide wurde of de supernatant kin wurde nommen nei sintrifugaasje by 12.000 rpm (~ 13.400 × g) foar 5 min.
2. Oermjittich gebrûk fan weefselmonsters of grutte weefsels.
Oanrikkemedaasje: It is it bêste om net mear as 1 Buccal swab yn 'e stekproef;as de stekproef is te grut, fergrutsje de dosering fan Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 accordingly.
3. De sample viscosity is te heech.
Oanbefelling: Samples kinne passend wurde verdund mei 10 mM Tris-HCl foardat genomyske DNA-ekstraksje.
4. Fragminten fan de bloedkaart binne sûge.
Oanbefelling: De transiente sintrifugaasjetiid fan stap 6 fan genomyske ekstraksje fan bloedplak (FTA Card) kin passend wurde ferlingd.
Lege opbringst of gjin DNA
D'r binne faak in ferskaat oan faktoaren dy't ynfloed hawwe op genomyske DNA-opbringst, ynklusyf sample oarsprong, sample opslachbetingsten, sample tarieding, manipulaasje, ensfh.
Genomysk DNA kin net wurde krigen tidens ekstraksje
De mooglike oarsaken binne as folget:
1. Unjildich behâld fan samples of opslach foar te lang liedt ta genomyske DNA-degradaasje.
Oanbefelling: Orale swabs moatte leafst farsk sampled wurde, en it is net oan te rieden om bewarre swabs te brûken foar genomyske DNA-ekstraksje operaasjes;bloedspotmonsters moatte derfoar soargje dat de kwaliteit kwalifisearre is en de opslachtiid moat net te lang wêze.
2. Te min weefselgebrûk kin resultearje yn gjin ekstraksje fan it oerienkommende genomyske DNA.
Oanrikkemedaasje: Folgje de buccale swab sampling ynstruksjes yn de operaasje gids, en wipe safolle kearen mooglik sadat genôch sellen kinne wurde hechte oan de mûnlinge swab foar genomic DNA ekstraksje;foar ekstraksje fan bloedspotmonsters kin it bloedspotsnijgebiet passend ferhege wurde.
3. Foregene Protease wurdt ferkeard bewarre bleaun, wat resulteart yn in fermindering fan har aktiviteit of ynaktivaasje.
Oanbefelling: Befêstigje de opslachbetingsten fan 'e Foregene Protease of ferfange it mei in nije Foregene Protease foar enzymatyske reaksje.
4. Unjildich behâld fan 'e kit of opslachtiid is te lang, wat resulteart yn it mislearjen fan guon komponinten yn' e kit.
Oanbefelling: Keapje in nije Buccal swab DNA isolaasje kit foar relatearre prosedueres.
5. Buffer WB foeget gjin absolute ethanol ta.
Oanbefelling: Befêstigje dat buffer WB it juste folume fan absolute ethanol tafoeget.
6. De eluent is net korrekt tafoege oan 'e silikonfilm.
Oanbefelling: Foegje 65 ° C foarwaarmde eluentdruppels ta oan 'e midden fan' e silikonmembraan en lit 5 min op keamertemperatuer om de effisjinsje fan eluaasje te ferheegjen.
Low-opbringst genomysk DNA isolearre
De folgjende mooglike oarsaken binne as folget:
1. Unjildich behâld fan samples of opslach foar te lang liedt ta genomyske DNA-degradaasje.
Oanbefelling: Orale swabs wurde by foarkar farsk sampled, en bewarre swabs moatte net brûkt wurde foar genomyske DNA-ekstraksje.
2. As de hoemannichte weefselmonster te lyts is, sil de ekstrahearre genomyske DNA-ynhâld minder wêze.
Oanbefelling: Folgje de ynstruksjes foar sampling fan mûnlinge swab yn 'e bestjoeringsgids, wiskje safolle kearen mooglik sadat genôch sellen oan' e mûnlinge swab kinne wurde hechte foar genomyske DNA-ekstraksje.
3. Foregene Protease wurdt ferkeard bewarre bleaun, wat resulteart yn in fermindering fan har aktiviteit of ynaktivaasje.
Oanbefelling: Befêstigje de opslachbetingsten fan 'e Foregene Protease of ferfange it mei in nije Foregene Protease foar enzymatyske reaksje.
4. Eluentproblemen.
Oanbefelling: Brûk Buffer EB foar eluaasje;as jo ddH brûke2O of oare eluenten, befêstigje dat de pH fan it eluaat tusken 7.0-8.5 is.
5. It eluaat is net goed dripke tafoege.
Oanbefelling: Foegje eluentdruppels ta oan 'e midden fan' e silikonmembraan en lit 5 min op keamertemperatuer litte om de effisjinsje fan eluaasje te ferheegjen.
6. De elueringsvloeistof accumulearret te min.
Oanbefelling: Brûk eluent foar genomyske DNA-eluaasje lykas fereaske yn 'e ynstruksjes, op syn minst net minder dan 15 μl.
Lege suverens fan genomysk DNA isolearre
Lege genomyske DNA-suverens kin liede ta mislearring of ûnfoldwaande resultaten fan streamôfwerts eksperiminten, lykas: enzymen kinne net iepen wurde, PCR kin it genfragmint fan belang net krije, ensfh.
De mooglike oarsaken binne as folget:
1. Heteroprotein fersmoarging, RNA fersmoarging.
Analyse: De suveringskolom waard net wosken mei Buffer PW;de buffer PW wask suvering kolom waard net wosken mei help fan de juste centrifugal snelheid.
Oanbefelling: Soargje derfoar dat d'r gjin delslach is yn 'e supernatant foardat jo ethanol tafoegje;wês wis dat jo de suveringskolom waskje neffens de ynstruksjes, en dizze stap kin net weilitten wurde.
2. Unreinens ion fersmoarging.
Analyse: Buffer WB wask suvering kolom waard weilitten of wosken mar ien kear, resultearret yn oerbleaune ionyske fersmoarging.
Oanrikkemedaasje: Wês wis dat jo Buffer WB 2 kear waskje lykas oanjûn om oerbliuwende ioanen safolle mooglik te ferwiderjen.
3. RNA enzyme fersmoarging.
Analyse: Bûtenlânske RNases waarden tafoege oan buffer;Buffer PW wask operaasje wie ferkeard, resultearret yn RNase residuen, beynfloedzje downstream RNA eksperimintele operaasjes, lykas in vitro transkripsje.
Oanrikkemedaasje: Foregene-rige nukleïnezuurisolaasjekits kinne RNA ferwiderje sûnder ekstra tafoeging fan RNase, dus hoecht buccale Swab / FTA Card DNA Isolation Kit RNase net ta te foegjen;wês wis te folgjen de ynstruksjes foar Buffer PW waskjen suvering kolom, en dizze stap kin net weilitten.
4. Etanol residu.
Analyse: Buffer WB hat gjin lege buis-sintrifugaasje útfierd nei it wassen fan de suveringskolom.
Oanbefelling: Fier de juste lege buis centrifugation operaasje út neffens de ynstruksjes.
5. Oare ûnreinensfersmoarging.
Analyse: Opsleine samples as spesjale samples wurde net foarbehannele.
Oanrikkemedaasje: Behannelje it stekproef goed foar as ynstruearre.
