Direkte RT-qPCR Kit III
Kit beskriuwing:
◮Direkte RT-qPCR Kit, mei help fan Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA Polymerase ûntwikkeljen troch Foregene, mei unike reaksje buffer, makket dizze kit mei sterke ferset en komptabiliteit, en it kin direkt test reaksje gebrûk Foregene Lysis systeem as sjabloan.Dizze kit kin fan tapassing wêze foar de ûntwikkeling fan nukleïnesûrdeteksjekit foar COVID-19 en oare patogene baktearjes.
Beskriuwing
Direct RT-qPCR Kit leveret apart ferpakte RT-qPCR-buffer (mei Foreasy HS Taq DNA-polymerase mingd) en heech effisjintForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),wêrtroch it handich is foar it meitsjen fan back-end kits en systeemoanpassing, binnen ienfâldige ferifikaasje.
Direkte RT-qPCR Kit, mei help fan Foreasy Reverse Transcriptase en Foreasy HS Taq DNA Polymerase ûntwikkeljen troch Foregene, mei unike reaksje buffer, makket dizze kit mei sterke ferset en komptabiliteit, en it kin direkt test reaksje gebrûk Foregene Lysis systeem as sjabloan.Dizze kit kin fan tapassing wêze foar de ûntwikkeling fan nukleïnesûrdeteksjekit foar COVID-19 en oare patogene baktearjes.
Dizze kit kin direkt de komponint wêze fan it IVD-produkt, maklik en fluch brûke.It hat allinich maklike ferifikaasje nedich, sûnder opnij te ûntwikkeljen.
Spesifikaasjes
500T, 50.000T
Kit komponinten
| Kit ynhâld (20 μL reaksjesysteem) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Foreasy Reverse Transkriptase(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 ml× 5 |
| 2× Direct qPCRMix-Taqman | 1ml × 5 | 500 ml×1 |
| Ynstruksje | 1 | 1 |
Operating Steps
A: Tariede fan sjabloan en reagens
1. Prepare taret RNA template (It is oan te rieden om te brûken Foregene Totaal RNA Isolaasje Kit rige kit te extract en suverjen RNA template) of sample cracking produkt (It is oan te rieden om te brûken Foregene Lysis systeem), spesifike primers (10 μM) en oare relevante verbruiksartikelen, ynstrumint.
2. Set de 2 × Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O en 20 × ROX Reference Dye (as it nedich is) yn 'e doaze mei iis, wêrtroch't dizze natuerlik smelten en sêft mingd.
B: Tariede fan RT-qPCR systeem
Krij de helte fan it folume fan reaksjebuffer fan reaksjesysteem (bygelyks as it folume fan it systeem 20 μL is, moat it 10 μL 2× Direct RT-qPCR-buffer krije). Foaroerienkommende bedrach fan enzyme, wy stelle dat foarM-MLV: 10-30 U/20 μL reaksjesysteem,TaqDNA polymerase:1-2 U / 20 μL reaksje systeemdit is ús suggestje, jo moatte it testen en oanpasse), foegje RNA-sjabloan, spesifike primers en probes ta, en foegje RNase-Free ddH ta2O oant 20 μL.De spesifike tarieding fan RT-qPCR-reaksjesysteem kin wurde ferwiisd nei de folgjende tabel 1.
Tabel 1: Tariede fan RT-qPCR systeem
| Komponint | Folume | Finale konsintraasje |
| 2× Direct RT-qPCR Buffer | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| Foarút Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Reverse Primer (10 μM) | 0,8 μL | 50-900 nM |
| Sonde (4 μM) | 1 μl | 200nM |
| Template (RNA of Lysate) | X μL | |
| 20 × ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| Totaal volume | 20 μL |
Opmerking: Forward Primer en Reverse Primer binne spesifike primers fan doelgen.It systeem fan 'e qPCR koe wurde oanpast neffens praktyske eksperimintele en PCR-modellen.Wy riede 400nM oan foar de definitive konsintraasje fan de measte primers.Pas it folume fan spesifike primers en probes oan neffens de taret konsintraasje en de oanrikkemandearre definitive konsintraasje, asjebleaft.
1 *: Selektearje passende definitive konsintraasje fan ROX Reference Dye neffens ferskate kwantitative PCR-ynstruminten.De optimale ROX Reference Dye-konsintraasje fan mienskiplike kwantitative PCR-ynstruminten wurdt werjûn yn 'e folgjende tabel:
| Kwantitative PCR-ynstruminten | Finale konsintraasje fan ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/stap ien,ensfh. | 1× (bygelyks 1μl 20×ROX Reference Dye tafoegje yn 20 μL reaksjesysteem) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P en Mx4000, ensfh. | 0,5 × (bygelyks, foegje 0,5 μl 20 × ROX Reference Dye ta yn 20 μL reaksjesysteem) |
| Roche PCR-ynstrumint, Bio-Rad PCR-ynstrumint, Eppendorf kwantitatyf PCR-ynstrumint, ensfh. | Sûnder ROX Reference Dye |
Opslach en Shelf libben
De kit moat wurde opslein by -20 ± 5 ℃.It moat fuortendaliks wurde opslein yn -20 ℃ thermostatyske kuolkast.De jildigensperioade is 2 jier as it yn gaadlike steat wurdt opslein.
