Escherichia Coli O157: H7 Nucleic Acid Detection Kit (PCR Fluorescent Probe Metoade / Lyofilisaasje)
Kit beskriuwing:
Cat.No.FP103
It wurdt brûkt foar rappe deteksje en screening fan E. coli O157: H7 yn iten, feed, wettermonsters en miljeumonsters.
Beskriuwings
It wurdt brûkt foarrappe deteksje en screening fan E. coli O157: H7 yn iten, feed, wettermonsters en miljeumonsters.
[Testprinsipe]
Neffens it prinsipe fan fluorescerende PCR-technology binne spesifike primers en Taqman-probes ûntwurpen foar it spesifike gen fan Escherichia coli O157: H7, en ûntdutsen troch in fluorescent PCR-ynstrumint, om de deteksje fan Escherichia coli O157: H7 te realisearjen Kwalitative deteksje fan DNA.
Kit ynhâld
Opmerking: ROX-kanaalsonde is net ynbegrepen.
| Componenten | Spesifikaasje | Qienheid |
| Buffer A | Tube | 1 |
| Buffer B | Tube | 1 |
| Posityf kontrôle | Tube | 1 |
| Negatyf kontrôle | Tube | 1 |
Ferwachte gebrûk
It wurdt brûkt foar rappe deteksje en screening fan E. coli O157: H7 yn iten, feed, wettermonsters en miljeumonsters.
Opslach Betingsten en ferfaldatum
Bewarje by -20 ℃ yn it tsjuster en foarkomme werhelle befriezing en ûntdooijen.
De jildichheidsperioade is 12moannen, en de produksjedatum wurdt werjûn op 'e bûtenferpakking.
Ynstruminten en verbruiksartikelen
Fluorescent kwantitatyf PCR-ynstrumint, pipettepistoal en bypassende tips, vortex-shaker, mini-sintrifuge.
Gebrûk
1. Sample Processing
1.1 Sampletype: Dizze kit is geskikt foar iten, feed, wettermonsters en oare samples dy't fertocht wurde kontaminearre troch Escherichia coli O157: H7.Foar djip ferwurke fleisprodukten, dranken en oare stoffen dy't pigminten befetsje, moatte se spiele wurde om foar te kommen dat it beynfloedzjen fan 'e kolleksje fan fluorescinsjesinjaal is.
1.2 Sample ferwurking: Ferwize nei "GB 4789.10-2016 Food Safety Nasjonale Standert Food Microbiological ûndersyk fan Escherichia coli O157: H7 Test" foar sample tarieding, ferriking kultuer en isolemint fan Escherichia coli O157: H7.
- Nekstraksje fan ucleic acid
Nim 20 mL fan ferrikingsoplossing yn in 1,5 mL sintrifugebuis, foegje 200 μL mikrobieel lysate ta (ekstra kit is nedich), vortex foar 30 sekonden, sintrifuge koart, en set oan 'e kant.
Remarks: De winning fan nucleic acid út de lysate moat wurde foltôge binnen 10 minuten, en kin net wurde opslein foar in lange tiid.
3. Nucleic Acid Amplification
3.1 Skeakelje it fluorescent kwantitative PCR-ynstrumint yn foar gebrûk.
Buffer A en Buffer B út 'e kit, smelt se yngeand, en sintrifuge koart.Foegje 18 μL Buffer A en 2 μL Buffer B ta oan elke PCR-reaksjebuis.Foegje dan 5 mL elk fan 'e negative kontrôle, extracted nucleic acid, en positive kontrôle yn PCR-reaksjebuizen, dekke de buizen en sintrifuge koart.
3.3 Ferpleats de PCR-reaksjebuis nei in fluorescent PCR-masine, en brûk de folgjende prosedueres om amplifikaasje-eksperiminten út te fieren: selektearje 25 mL foar it reaksjesysteem, sammelje fluoreszinsjesinjalen by 60 ° C foar elke syklus, en selektearje FAM foar it deteksjekanaal.
| Stap | Programma | Oantal syklusen |
| 1 | 37℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60 ℃ 30s (fluoreszinsje sammelje) |
Gidsen foar analyse fan problemen
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Gjin RNA kin ekstrahearre wurde of de opbringst fan nukleïnesûr is leech
D'r binne normaal in protte faktoaren dy't de effisjinsje fan herstel beynfloedzje, lykas: sample RNA-ynhâld, wurkwize, elueringsvolumint, ensfh.
Analyse fan mienskiplike oarsaken:
1.Iisbad of leech-temperatuer (4 ° C) sintrifugering by operaasje.
Suggestje: keamertemperatuer (15-25 ° C) operaasje, nea iis bad en lege temperatuer centrifuge.
2. Unjildich sample opslach of sample opslach foar te lang.
Suggestje: Bewarje samples by -80 ° C of befrieze yn floeibere stikstof, en foarkom werhelle gebrûk fan freeze-dooi;besykje nij sammele samples te brûken foar RNA-ekstraksje.
3.Unfoldwaande sample lysis
Oanbefelling: Soargje derfoar dat it probleem en de wurkoplossing (Linear Acrylamide) yngeand mingd binne en 10 min ynkubeare by keamertemperatuer (15-25 ° C)
4.De eluent is ferkeard tafoege
Oanbefelling: Soargje derfoar dat RNase-Free ddH2O wurdt tafoege oan 'e midden fan it membraan fan' e suveringskolom
5.Improper folume fan anhydrous ethanol yn Buffer viRW2
Suggestje: Folgje asjebleaft de ynstruksjes, foegje it juste folume fan wetterfrije ethanol ta oan Buffer viRW2 en mingje se goed foardat jo de kit brûke.
6.Improper sample gebrûk.
Suggestje: 200µl fan monster per 500µl fan Buffer viRL.Oermjittich sample folume sil resultearje yn redusearre RNA ekstraksje rate.
7.Improper elueringsvolume of ûnfolsleine eluaasje.
Suggestje: It eluentvolumint fan 'e suveringskolom is 30-50μl;as it elueringseffekt net befredigjend is, is it oan te rieden om foarferwaarme RNase-frije ddH ta te foegjen2O en ferlingje de tiid pleatsing by keamertemperatuer, lykas 5-10min
8.Purification kolom hat ethanol residu nei spoelen yn Buffer viRW2.
Suggestje: As ethanol noch bliuwt nei it spoelen yn Buffer viRW2 en lege-buis-sintrifugering foar 2min, kin de suveringskolom 5min by keamertemperatuer bliuwe nei centrifugaasje fan lege buis om de oerbleaune ethanol folslein te ferwiderjen.
Degradaasje fan suvere RNA-molekulen
De kwaliteit fan it suvere RNA is relatearre oan faktoaren lykas sample opslach, RNase fersmoarging, en operaasje.
Analyse fan mienskiplike oarsaken:
1.De sammele samples waarden net op 'e tiid bewarre.
Suggestje: As it stekproef net op 'e tiid nei sammeling wurdt brûkt, bewarje it dan asjebleaft by -80 ℃ of floeibere stikstof fuortendaliks.Foar de ekstraksje fan RNA-molekulen, besykje nij sammele samples wannear mooglik te brûken.
2.Collected samples waarden freezing en thawing ferskate kearen.
Suggestje: Foarkom werhelle befriezen en ûntdooien (net mear as ien kear) by it sammeljen en opslaan fan monsters, oars sil de opbringst fan nukleïnesûr ôfnimme.
3.RNase waard yntrodusearre yn 'e operaasjekeamer of gjin wegwerphandschoenen, maskers, ensfh.
Suggestje: De winning fan RNA-molekulen eksperimint wurdt it bêste útfierd yn in aparte RNA-operaasjekeamer, en de eksperimintele tafel wurdt skjinmakke foar it eksperimint.Draach wegwerphandschoenen en maskers tidens it eksperimint om RNA-degradaasje te foarkommen feroarsake troch RNase-yntroduksje.
4.De reagens is kontaminearre troch RNase tidens it gebrûk.
Suggestje: Ferfange mei nije Viral RNA Isolation Kit foar relatearre eksperiminten.
5.De RNase fersmoarging fan de sintrifuge buizen, pipette tips, ensfh Suggestie: Soargje derfoar dat de centrifuge buizen, pipette tips, en pipetten binne allegear RNase-Free.
De suvere RNA-molekulen beynfloede streamôfwerts eksperiminten
De RNA-molekulen suvere troch de suveringskolom sille ynfloed hawwe op streamôfwerts eksperiminten as d'r tefolle sâltionen of aaiwiten binne, lykas: omkearde transkripsje, Northern Blot, ensfh.
1.Der binne oerbleaune sâltionen yn 'e eluearre RNA-molekulen.
Oanbefelling: Soargje derfoar dat it juste folume fan anhydrous ethanol is tafoege oan Buffer viRW2, en waskje de suvering kolom twa kear neffens de juste centrifugation snelheid op de operaasje ynstruksjes.Fier dan sintrifugering út om fersmoarging fan sâltionen foar it grutste part te ferwiderjen
2.Der binne oerbleaune ethanol yn 'e eluearre RNA-molekulen
Suggestje: ienris befêstigje dat suvering kolommen binne spoeld troch Buffer viRW2, útfiere lege-buis centrifugation neffens de centrifugal snelheid op de operaasje ynstruksjes.As d'r noch ethanol oerbliuwt, kin it 5 minuten by keamertemperatuer nei in lege buis-sintrifugering wurde litten om de oerbleaune ethanol foar it grutste part te ferwiderjen.
Ynstruksje hânboeken:
Viral RNA Isolation Kit Instruction Manual
